非编码RNA日益成为国际上研究的热点,它不仅能调控基因表达,而且与癌症密切相关。miRNA作为非编码RNA一部分,组织特异性表达是其一个重要特征,发现组织特异性表达的miRNAs是研究其生物学功能的第一步。另外,miRNA在不同的发育阶段以及不同的性别之间表达谱也不尽相同。本论文主要从以下三方面展开:(1)收集小鼠18种组织的miRNAs:利用EndNote,通过检索PubMed获得关于研究小鼠miRNA的文献约300篇,并精读文献收集小鼠各组织在不同发育时期和不同性别等各种条件下表达的miRNAs,为组织特异性表达miRNAs的筛选做准备;(2)采用微流体芯片技术筛选小鼠6种组织的miRNAs:微流体芯片技术具有灵活性强、自动化程度高、适用范围广、样品损耗少、无交叉污染和结果重现性好等特点,该技术的应用为高通量筛选基因表达提供了一种便捷、经济高效的方法。通过解剖获取四只C57BL/6小鼠六种组织:大脑,小脑,肝脏,肺,睾丸和肾。对于每种组织,分别取来自四只小鼠的等量组织混合后提取总RNA,利用尿素变性PAGE凝胶回收small RNA(smRNA,10-50 nt),分别将5’和3’RNA adapter连接到smRNA的两端,通过RT-PCR构建smRNA库(smRNA库中包含miRNA),利用非变性PAGE凝胶将miRNA对应的条带回收,最后通过荧光引物PCR(signal primer PCR)的方法对miRNA库进行荧光标记。利用微流体芯片对各组织表达的miRNA进行检测,该方法对痕量表达的miRNAs有很好的检测效果。为提高检测结果的精确度,取5次重复中至少有4次检测到信号的为可信结果,结果发现大脑中有246条miRNAs表达,小脑中有291条miRNAs表达,肝脏中有209条miRNAs表达,肺中有230条miRNAs表达,睾丸中有84条miRNAs表达,肾中有40条miRNAs表达。(3)结合(1)和(2)分析小鼠6种组织的组织特异性表达的miRNAs:通过对六种组织检测到的miRNAs进行比较筛选,得到除睾丸之外其它五种组织的组织特异性表达的miRNAs。为进一步得到更为可靠的结果,与基于大量文献收集的小鼠各组织在不同条件下表达的miRNAs进行再一次的比较筛选,结果发现,六种组织之间比较得出的组织特异性表达的miRNAs,有一部分miRNAs在其他组织中仍有表达。说明,信息学与实验学相结合是有力的科研手段。微流体芯片技术与生物信息学的有机结合,不仅可以避免大量不必要的重复实验,节约成本,而且可以加快科研速度,提升科研水平。二者的有力结合也必将为生物学的发展带来新的契机。