【摘 要】
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目的:明确NADPH氧化酶1（Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1,NOX1）在结直肠癌中表达的情况及其与临床特征之间的关系。探讨NOX1是否可以通过介导氧化应激而引起结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）细胞的增殖和迁移,促进结直肠癌的发生发展,从而为结直肠癌患者的临床诊断及其治疗方法提供了实验基础依据。方法:
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目的:明确NADPH氧化酶1（Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1,NOX1）在结直肠癌中表达的情况及其与临床特征之间的关系。探讨NOX1是否可以通过介导氧化应激而引起结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）细胞的增殖和迁移,促进结直肠癌的发生发展,从而为结直肠癌患者的临床诊断及其治疗方法提供了实验基础依据。方法:收集2019年01月至2020年12月在湖南省人民医院确诊并手术切除的91例原发性结直肠癌患者标本;采用免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IHC）来检测NOX1蛋白在人CRC组织的表达情况。应用小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）来干扰人结直肠癌细胞株（DLD1）中NOX1的表达。通过荧光定量PCR检测DLD1细胞中NOX1 mRNA的表达。用Western blotting检测DLD1细胞中NOX1蛋白表达水平。采用CCK-8测定法用于检测DLD1细胞的生长和增殖。利用Transwell小室来评估DLD1细胞的迁移能力。通过荧光探针DCFH-DA检测DLD1细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量。结果:1.HIC结果显示,NOX1在人结直肠癌组织中表达增加,按照不同临床指标分组,对NOX1在各组间的表达差异统计并分析,结果发现NOX1的表达与肿瘤分化程度、肿瘤直径及有无远处转移有关（P<0.05）;而与性别、年龄、肿瘤部位、有无脉管及神经侵犯、有无淋巴结转移无明显相关性（P>0.05）。2.荧光定量PCR及Western blotting检测结果显示,NOX1 siRNA干预NOX1mRNA和蛋白水平显著低于阴性对照组（negative control,NC）和空白对照组,其差异有统计学意义（P<0.05）;NC组与空白组中NOX1表达水平相比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3.CCK-8结果显示,与NC组、空白组相比较,NOX1 siRNA干预组24h的细胞增殖水平及增殖率无差异,（P>0.05）;NOX1 siRNA干预48h、72h、96h的细胞增殖及细胞增殖控制率明显下降,其差异有显著统计学意义（P<0.05）,NC组与空白组中细胞增殖情况与细胞增殖控制率相比较,差异无统计学意义(（P>0.05）。4.Transwell迁移实验结果显示,NOX1 siRNA干预组的细胞迁移数目明显低于NC、空白组（P<0.05）;而NC组与空白组差异无统计学意义（P>0.05）。5.荧光探针DCFH-DA测定处理后的DLD1细胞中ROS含量,结果显示NOX1siRNA干预组较NC和空白组的ROS水平降低,其差异有统计学意义（P<0.05）。NC与空白组相比较,其差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.本研究证实了NOX1在结直肠癌组织中表达增加,并且其表达与肿瘤分化程度、肿瘤直径、有无远处转移有关,提出NOX1高表达可能参与结直肠癌的发病。2.进一步通过体外实验,敲除人结直肠癌细胞株（DLD1）中NOX1的表达后,DLD1细胞的增殖和迁移明显被抑制,并且NOX1表达敲低抑制细胞中ROS的生成,提示NOX1作为ROS生成来源之一,可能通过介导氧化应激的发生参与直肠癌的发病、发展。因此,NOX1有望成为结直肠癌生物治疗的一个靶点。
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