RA FLS中PTEN和survivin基因表达相关性和调控机制的研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:prince262
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目的:构建pc-PTEN表达载体和U6-sur干扰载体,以类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞为主要研究对象,研究PTEN和survivin基因表达相关性及相关调控机理,为RA的治疗提供实验依据。方法:构建pc-PTEN表达载体和U6-sur干扰载体,培养RA FLS,于第三代至第七代用于实验,分别用pc-PTEN表达载体和U6-sur干扰载体转染RA FLS, RT-PCR检测PTEN和survivin mRNA表达量,western blot检测PTEN和survivin蛋白表达量,CCK8检测细胞增殖变化,划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-PCR检测MMP-1、MMP-3、MMP-9、 IL-6mRNA表达量。结果:1.测序结果显示pc-PTEN表达载体和U6-sur干扰载体插入片段正确,载体均构建成功;2. RA FLS转染pc-PTEN表达载体后,PTEN基因表达水平和蛋白表达水平升高,survivin基因表达水平和蛋白表达水平明显降低;转染U6-sur干扰载体后,survivin基因表达水平和蛋白表达水平明显降低;3.RA FLS转染pc-PTEN表达载体或U6-sur干扰载体后,FLS细胞增殖功能显著受到抑制(p<0.05),细胞迁移的功能显著受抑制,MMP-1、MMP-3、MMP-9、IL-6mRNA表达量明显减少(p<0.05)。结论:成功构建了pc-PTEN表达载体及U6-sur干扰载体;两种载体在RA FLS中均能有效表达;转染pc-PTEN表达载体及U6-sur干扰载体后,RA FLS的细胞增殖、细胞迁移、细胞炎症及细胞侵袭均受明显抑制;PTEN-PI3K-survivin信号通路可能存在于RA FLS中。
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