论文部分内容阅读
目的： 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种呼吸系统常见的疾病，具有高发病率、高致死率和高致残率特点，给社会和患者带来沉重负担。目前COPD个体化治疗逐渐得到共识，即对患者进行治疗前病情综合评估，根据评估结果选择合适的治疗方案。本课题组前期研究只表明了健脾益肺Ⅱ号（JYⅡ号）的临床疗效，但未能根据病情综合评估方法评价其对不同组别患者的临床疗效的侧重点。同时，其治疗作用基础尚不明确。基于以上所述，本课题研究旨在通过前期临床疗效的再分析和动物实验研究，明确JYⅡ号对病情评估后不同组别患者的临床治疗优势，并从炎症角度探讨其作用基础，从而更好地指导COPD临床个体化治疗。 方法： (1)临床研究方面，根据2011年COPD全球倡议（修订版）首次提出的病情综合评估方法（本研究采用mMRC和气流受限GOLD分级法），对本课题组2008.1-2009.10收集的263例COPD稳定期患者进行病情综合评估，分为A、B、C、D组，观察JYⅡ号对各组患者急性加重次数、肺功能、BODE指数、6分钟步行距离(6MWB)、SGRQ、中医证候计分等指标的影响并对病例进行ITT分析。 (2)动物实验研究方面，将75只SD大鼠根据体重按照随机数字表随机分为五组，分别是正常组、模型组、JYⅡ号高剂量组(20g/kg/d)、JYⅡ号低剂量组(10g/kg/d)和氨茶碱组(60mg/kg/d)，通过熏烟（8周）和脂多糖(LPS)滴入气管法（2次）建立COPD模型大鼠，造模4周后予JYⅡ号和氨茶碱干预4周。实验结束后，测定各组大鼠肺功能、观察肺组织病理变化;酶链免疫吸附法测定肺组织和支气管灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-8水平;免疫组织化学法检测肺组织中TNF-α表达;Western blot法观察HDAC2蛋白、P38MAPK蛋白、磷酸化P38MAPK蛋白、NF-κ B P65蛋白、IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白在肺组织中的表达情况;Real time-PCR方法检测肺组织中TNF-α mRNA、蛋白酶体20SmRNA表达水平。 结果： (1)临床研究方面: ①各组急性加重次数变化情况:与对照组相比，D组中治疗组患者治疗后的急性加重次数减少（P＜0.01），具有统计学意义。 ②各组6分钟步行距离变化情况:与对照组相比，B组中治疗组患者治疗后、随访后6MwD增加（P＜0.05），具有统计学意义。与治疗前相比，四组中治疗组患者治疗后的6MwD均上升（P＜0.05），均具有统计学意义。与治疗前相比，C组中对照组患者治疗后的6MWD下降（F=6.96，P=-0.03＜0.05），具有统计学意义，与治疗后相比，B组中对照组患者随访后的6MWD下降（P＜0.05），具有统计学意义。 ③各组中医证候计分变化情况:与对照组相比，A组中治疗组患者随访后、C组中治疗组患者随访后和治疗后及D组中治疗组患者随访后的中医证候计分下降(P＜0.05)，具有统计学意义。与治疗前相比，四组中治疗组和对照组患者治疗后的中医证候计分下降（P＜0.05），具有统计学意义。 ④各组SGRQ变化情况:与对照组相比，D组中治疗组患者治疗后的SGRQ下降(P＜0.05)，具有统计学意义。与治疗前相比，四组中治疗组患者治疗后的SGRQ下降(P＜0.05)，具有统计学意义。与治疗前相比，A、B、D组中对照组患者治疗后的SGRQ下降（P＜0.05），具有统计学意义，与治疗后相比，A、B组中对照组患者随访后的SGRQ下降（P＜0.05），具有统计学意义。 (2)动物实验研究方面: ①大鼠体重变化情况:与正常组相比，模型组体重减轻（P＜0.05），实验前后体重差值减小（P＜0.05），无统计学意义。与模型组相比，药物干预组的体重和实验前后体重差值无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。 ②肺功能指标:与正常组相比，模型组大鼠TLC指标升高(P＜0.05)，具有统计学意义。与模型组相比，药物干预组TLC指标无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义。与正常组相比，模型组大鼠RI和FEV0.1/FVC无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。与模型组相比，药物干预组RI和FEV0.1/FVC无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。 ③肺组织HE染色:与正常组相比，模型组大鼠支气管粘膜上皮肿胀、紊乱，杯状细胞增多，周围淋巴细胞浸润，肺泡壁变薄，肺泡腔明显扩大，部分肺泡融合形成肺大泡。药物干预组较模型组肺组织病理损害有所改善。 ④肺组织及肺泡灌洗液中炎症因子表达:与正常组相比，模型组大鼠肺组织中的TNF-α、IL-6、IL-8含量均升高（P＜0.05），具有统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-H组和氨茶碱组大鼠肺组织中的TNF-α、IL-6、IL-8含量降低（P＜0.05），具有统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-L组肺组织中的TNF-α、IL-6、IL-8含量无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义。与正常组相比，模型组BALF中TNF-α含量升高(P＜0.05)，具有统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-H和氨茶碱可使BALF中的TNF-α含量降低(P＜0.05)，具有统计学意义，JYⅡ-L对BALF中的TNF-α含量影响作用不显著(P＞0.05)，无统计学意义。 ⑤免疫组化结果:正常大鼠肺组织内大气道上皮细胞TNF-α表达水平较低，而模型组则为强阳性表达，气道上皮细胞出现大量的棕褐色颗粒。JYⅡ号组和氨茶碱组呈阳性表达，气道上皮细胞表现为棕黄色颗粒。与正常组相比，模型组肺组织中TNF-α表达水平增加(P＜0.05)，具有统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-H和氨茶碱可使肺组织中TNF-α表达水平降低（P＜0.05），具有统计学意义，而JYⅡ-L对肺组织中TNF-α表达水平影响作用不显著（P＞0.05），无统计学意义。 ⑥Western blot和Real time-PCR结果示:与正常组相比，模型组大鼠肺组织P38蛋白、p-P38蛋白表达及两者比值均升高，NF-κ B P65蛋白表达增加，IκB-α蛋白表达减少，p-Iκ B-α蛋白表达增加，p-IκB/IκB比值增大，HDAC2蛋白表达降低，P＜0.05，均具有统计学意义。与模型组相比，药物干预组P38蛋白表达无显著差异（P＞0.05），无统计学意义。与模型组相比，JYⅡ-H组和氨茶碱组p-P38蛋白表达和p-P38/P38比值均降低，NF-κ B P65蛋白表达减少，IκB-α蛋白表达增加，p-IκB-α蛋白表达减少，p-IκB/IκB比值减小，HDAC2蛋白表达升高，P＜0.05，存在着显著差异，与模型组相比，JYⅡ-L组p-P38蛋白、NF-κ B P65蛋白、IκB-α蛋白、p-Iκ B-α蛋白、HDAC2蛋白表达及p-IκB/IκB比值、p-P38/P38比值无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义。 与正常组相比，模型组蛋白酶体20S mRNA和TNF-α mRNA表达水平升高（P＜0.05），具有统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-H组蛋白酶体20S mRNA表达水平降低(P＜0.05)，具有统计学意义，而JYⅡ-L组和氨茶碱组蛋白酶体20S mRNA表达水平无明显差异（P＞0.05），无统计学意义;与模型组相比，JYⅡ-H组和氨茶碱组TNF-α mRNA表达水平降低（P＜0.05），具有统计学意义，JYⅡ-L组TNF-α mRNA表达水平无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义。 结论： (1)临床研究方面:JYⅡ号对高风险的COPD患者疗效显著，一方面改善C组患者临床症状，另一方面提高D组患者生活质量;对低风险的COPD患者作用表现为改善A组患者的临床症状，提高B组患者运动耐力。 (2)动物实验研究方面:①香烟烟熏（8周）及LPS气管内滴入（2次）可诱导大鼠发生COPD病理改变和炎症反应。炎症反应参与了COPD的发生发展过程。②P38MAPK信号通路、NF-κB信号通路和HDAC2蛋白共同介导了COPD炎症反应，合成多种炎性细胞因子，参与了COPD的发生发展过程;同时蛋白酶体20S参与了NF-κB信号通路的激活，HDAC2蛋白表达减少可能间接促进了NF-κB信号通路介导炎症因子的转录。③JYⅡ号对COPD炎症反应有一定的抑制作用，可能是通过抑制P38MAPK信号通路和NF-κB信号通路的转导实现的，同时JYⅡ号还可增强HDAC2蛋白表达，减少蛋白酶体20S基因转录，间接抑制NF-κB信号通路的激活。 (3)以健脾为中心的扶正补益类中药复方亦可能通过抗炎作用治疗COPD稳定期的慢性炎症。