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鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病。各种年龄、类型的鸡均易感。该病呈世界分布，是严重危害养鸡业的重大传染病之一。传染性支气管炎病毒属于冠状病毒科冠状病毒属，为不分节段的单股正链RNA病毒，包含至少3种结构蛋白基因：纤突蛋白(S)基因、核蛋白(N)基因、膜蛋白(M)基因。IBV的S蛋白由S1蛋白和S2蛋白两部分组成，在病毒进化中最为活跃，是最重要的保护性抗原，能刺激机体产生中和抗体，在病毒吸附细胞过程中发挥重要作用，在血清学分类、疫苗免疫防治上起决定性作用；N蛋白进化上最为保守，主要与基因组核酸的包裹、RNA的复制和细胞免疫有关，含有大量抗原决定簇，免疫原性仅次于S蛋白，能诱导机体产生大量抗体。自1931年发现该病以来，至少已有二十九种血清型被报道，并且新的血清型和变异株仍在不断出现。鉴于此，通过克隆表达具有高度保守性的N蛋白基因，并其为诊断抗原建立检测IBV抗体的ELISA法，为监测群体的抗体水平，预防和控制该病提供可靠的依据和有效的技术保障。同时克隆、表达具有型特异性的S1蛋白基因以便为下一步研究该病的基因工程疫苗奠定基础。本课题的主要研究内容包括： 1、传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因和核蛋白基因的克隆与序列分析 以GenBank公布的IBV基因组的序列为依据，分别设计针对S1基因和N基因的特异性引物，通过RT-PCR法从IBV基因组中扩增出完整的S1和N片断，将扩增片断分别克隆到pMD18-T载体，经酶切和序列测定，S1、N基因片断大小分别为1685bp和1230bp；用BLAST比对发现：S1基因与GX1-98毒株同源性为98％，N基因与H52毒株LKQ3同源性为97％。 2、传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因和核蛋白基因在大肠杆菌中的表达 构建了弃信号肽区S1基因表达载体pGEX-S1和N基因表达载体pGEX-NP，并成功进行了表达，对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定，结果表明S1分子量大约为80kDa；N蛋白表达于细胞质中，有两种主要产物，大小分别为80 kDa和60 kDa，并利用GST亲和层析柱进行了纯化，获得了相应纯化产物，Western-blot显示纯化产物均能与鸡IBV标准阳性血清发生特异性反应，说明有很好的免疫学活性。 3、基于重组N蛋白的IBV抗体ELISA检测方法的建立