多糖合剂的制备及质量鉴定的研究

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多糖又称多聚糖,广泛存在于植物、动物、微生物和海洋生物等生物机体中,是生物体内除蛋白和核酸以外一类重要信息分子。多糖具有多种生物活性:抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗菌、免疫调节、抗凝血、降血糖、降血脂、抗过敏、抗炎和抗病毒等。每一种多糖均具有其特有的生物活性,如果将几种多糖联合应用,可能使其具有多种生物活性,在预防和治疗疾病方面将起到非常重要的作用,因此,多糖合剂的研究与开发具有重要的理论意义和应用价值。本文以水提醇沉法从人参、松茸和香菇中分别提取多糖,经过Sevag法脱蛋白、氧化法脱色素分离纯化后,获得精制多糖,制备多糖合剂,采用CTL毒活性试验,通过正交试验确定多糖合剂的最佳组方,即人参多糖:松茸多糖:香菇多糖(1:1:1),三种多糖浓度均为200mg/L。本文对人参多糖、松茸多糖、香菇多糖及多糖合剂进行质量鉴定的研究:(1)人参多糖、松茸多糖和香菇多糖的提取率分别为8.85%、9.40%、10.5%;(2)采用苯酚-硫酸法,对多糖中总多糖含量进行测定,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中总多糖含量分别为62.96%、59.13%、33.86%和53.17%;采用间羟基联苯法,对多糖中糖醛酸含量进行测定,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中糖醛酸含量分别为16.44%、9.37%、4.47%和9.54%;采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS),对多糖中还原糖含量进行测定,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中均不含有还原糖;多糖样品经过前处理后,采用DNS法,对多糖中淀粉含量进行测定,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中淀粉含量分别为7.26%、2.80%、3.77%和3.94%。(3)采用液质联用色谱法,对人参多糖、松茸多糖和香菇多糖中单糖组分进行分析,人参多糖由D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、鼠李糖3种单糖组成,摩尔比为62.85:3.23:0.79;松茸多糖由D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、D-木糖3种单糖组成,摩尔比为115.50:0.20:0.27;香菇多糖由D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、果糖5种单糖组成,摩尔比为3.15:0.16:0.18:3.42:2.27。(4)采用凝胶渗透色谱法,对人参多糖、松茸多糖和香菇多糖分子量及分布进行测定,人参多糖含有重均分子量为2.08×106、5.52×105、1.44×105、1.87×104、3.38×103和5.48×102的多糖成分;松茸多糖含有重均分子量为2.59×106、1.39×105、3.69×104、1.16×104、4.83×102、和6.30×10的多糖成分;香菇多糖含有重均分子量为1.89×106、3.21×105、1.09×105、2.26×104、和5.22×102的多糖成分。对人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂进行稳定性研究,在高温条件下,总多糖含量下降未超过7%;在强光照条件下,总多糖含量下降超过10%,说明多糖应该避光保存;在高湿度条件下,吸湿增重超过14%以上,说明多糖容易吸湿,应该密闭干燥保存。在加入不同pH溶液、氧化剂(H2O2)和还原剂(Na2SO3)后,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂溶液的吸光度值没有明显变化,表明它们均有较好的酸碱稳定性和抗氧化还原性。对人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂进行卫生学检测,人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中菌落总数分别为120、0、0和50CFU/g;人参多糖、松茸多糖、香菇多糖和多糖合剂中均未检出大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌,均符合2010版《中国药典》微生物限度标准。
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