作为目前影响奶牛业发展,给乳品生产带来巨大损失的一种常见多发病,奶牛乳腺炎已成为奶牛疾病中的防治重点,金黄色葡萄球菌是其临床病例中最常分离到的病原体。目前临床治疗金黄色葡萄球菌所致的乳腺炎,多采用中草药制剂、灭活疫苗和抗生素等疗法,但“抗性奶”和耐药菌株等不良反应促使人们寻求更好的解决途径。但针对金黄色葡萄球菌的疫苗并不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,随着免疫学和分子生物学的发展,抗体制剂逐渐进入人们视野,尤其是单链抗体,既保留了完整的抗原抗体结合位点,又具有分子量小,免疫原性低,组织穿透能力强等优点,单链抗体(scFv)目前已成功应用于抗体治疗且已经显示出一定的作用。本研究以影响其致病性的重要的毒力因子-α溶血素(Hla)为研究对象,首先以金黄色葡萄球菌DNA为模板扩增得到Hla编码基因,然后将其转化到E.coli中进行表达纯化,得到其原核表达产物(rHla),进一步以此为抗原,从牛源噬菌体单链抗体表达文库中筛选到了多株针对rHla的高亲和力的scFv,并选择一株进行原核表达,获得了纯化的scFv蛋白,命名为scFvZZ107。为进一步验证α溶血素单链抗体的保护作用,在处于泌乳期的感染金黄色葡萄球菌小鼠乳腺炎模型中,攻入不同浓度的scFvZZ107,通过细菌计数、病理组织切片观察、测定细胞因子含量及观察乳腺组织细胞凋亡情况,验证该单链抗体对金黄色葡萄球菌所致小鼠乳腺炎的保护作用。结果显示,与阴性对照组相比,不同剂量的scFv试验组对乳腺内感染均有保护作用,且中、高剂量单链抗体试验组中,细菌数量显著减少(P<0.05),乳腺组织较为完整,且除TNF-α和IL-6含量无显著变化外,IL-1α、IL-1β、IL-8和IL-10的含量均显著降低(P<0.05),表明α溶血素单链抗体对小鼠乳腺炎可能具有一定的保护作用。本研究结果一方面为治疗金黄色葡萄球菌所致奶牛乳腺炎提供一种潜在的优质抗体分子;另一方面也可为在分子水平上研究α溶血素的致病机制提供了一定理论依据。