目的:探讨改良后的大鼠减体积肝移植模型的效果;为进一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏再生及免疫的研究提供重要的技术平台和前提条件。方法:1.实验大鼠均为健康的SD大鼠,体重260-280 g,供体为雌性,受体为雄性,供、受体体重相差10 g左右,一般为供体体重比受体体重轻。2.供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾上腺静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7-0无损伤血管缝线吊线。3.受体切肝前采用单人裸眼操作,从新肝移植开始采用双人裸眼配合操作;供体完成胆道支撑架安置以后,受体即开始手术;肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用“8”字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆道支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型。4.改良的的大鼠减体积肝移植采用文献报道的方法进行,供肝在修肝盆中进行相应的肝叶切除。5.改良前和改良后两组术中和术后均观察大鼠的症状和体征、各种并发症的发生情况、术后生存情况、肝功能的变化等等。结果:1.改良后的减体积肝移植模型供体手术时间为32±2 min,修肝时间为6±2 min,受体手术时间为40±3 min,无肝期时间为14±3 min,供肝的冷保存时间为51±3min;手术的成功率为92%,术后3 d的存活率为85%,术后2周存活率为83%;术后并发症较改良前明显减少,差异有显著性（P<0.05）。2.术后1 d、3 d和7 d的肝功能ALT变化为改良后较改良前低,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异有显著性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异无显著性（P>0.05）。3.术后1 d、3 d和7 d的肝功能TBIL变化为改良后较改良前低,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异有显著性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异无显著性（P>0.05）。4.术后1 d、3 d和7 d的胆碱酯酶变化为改良后较改良前升高,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异有显著性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异无显著性（P>0.05）。5.术后1 d和3 d的血氨变化为改良后较改良前降低,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异有显著性（P<0.05）;术后第7 d、14 d和21 d,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异无显著性（P>0.05）。结论:1.改良大鼠减体积模型采用供体灌注完成后,在切取供肝的过程中进行相应肝叶的切除;可获得高质量、满意的减体积供肝;供受体手术配合,尽量的缩短供肝的冷保存时间;改进的血管吻合技术缩短无肝期、减少术后出血;对诸多细节操作的改进等;这些可以尽量的减少大鼠减体积肝移植术中和术后的并发症,提高大鼠减体积肝移植模型的成功率和长期生存率。是一种值得推广的大鼠减体积肝移植模型。2.成功的改良大鼠减体积肝移植模型为我们下一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏的再生和免疫的研究提供了研究的基础和前提。目的:探讨在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上;利用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的蛋白质组学的变化,找到与肝脏再生有关的差异蛋白质。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右;受体为均为健康的Wistar雄性大鼠,体重220-250 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,供肝与受体肝之比大约50%左右。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、3 d和7 d获取移植后的肝脏组织标本,供体和受体的正常肝脏组织标本在进行移植手术时获取,将标本放置在-70℃冰箱保存。3.将获取的标本进行大鼠减体积肝移植术后的蛋白质组学的检测分析。对移植后的肝脏组织与供体和受体正常肝脏组织进行比较蛋白质组学的研究,即在双向电泳的基础上进行MS-MS串联质谱分析,从而鉴定表达差异在10倍以上的蛋白质点,分析差异表达的蛋白质的功能,以及与大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的相关性等。结果:1.得到了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱,以差异10倍以上为标准,共找到了72个差异蛋白质点。2.对72个差异表达的蛋白质点进行MS-MS串联质谱鉴定和肽谱指纹图分析,72个点全部鉴定出,共鉴定到40种蛋白。3.这些蛋白主要参与细胞信号转导、应激反应、氧化还原、碳水化合物代谢、能量代谢、氨基酸代谢和细胞骨架等生理过程。有些蛋白直接或者间接参与肝移植术后肝脏再生的过程。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.采用比较蛋白质组学的方法成功鉴定了72个差异蛋白质点40种蛋白。3.找到与大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞再生有关的差异蛋白,这些蛋白质对大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞的再生作用可能主要通过两个方面完成:一是直接促进肝脏组织细胞的再生:一是间接的促进肝脏组织细胞的再生。4.为下一步深入研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的机理等相关问题提供了一定的基础研究成果。目的:在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上,研究减体积肝移植术后肝脏再生的一般情况,受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞;在肝脏再生基本完全后（大约在减体积肝移植术后第9 d）,撤除抗免疫排斥药物以后观察各组排斥反应发生的情况,最终得出:减体积肝移植术后,肝脏再生诱导免疫低反应并探讨可能的机理。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右,受体均为健康的Wistar雄性大鼠,体重240-380 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,详细见第一部分模型的建立。3.实验分组（1）实验一组（A组）:全肝移植组。供体和受体体重相差在10 g以内。（2）实验二组（B组）:50%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为50%。（3）实验三组（C组）:30%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为30%。4.实验分为两个小部分（1）第一小部分:观察不同体积的大鼠肝移植术后肝脏的再生情况。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、2 d和7 d获取血和移植后的肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。（2）第二小部分:观察肝脏再生诱导免疫低反应。不同减体积肝移植术后,待肝脏再生基本完全后,同时撤除FK506,观察其三组的排斥反应的发生情况。在撤除FK506后的0 d、3 d、7 d和11 d取血和肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。5.移植大鼠生存状态观察和移植排斥反应的判断:大鼠术后3 d内死亡,则弃之不用,并给与补充。观察每组的生存时间,根据国际公认的Banff评分系统判断排斥反应程度。6.血清生化检测ALT、AST、TBIL;血清细胞因子检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β₁的水平。7.肝脏组织的ELISA检测:观察肝脏再生的IL-6和TNF-α水平;观察排斥反应TGF-β₁水平。8.肝脏组织免疫组化检测:观察肝脏再生的IL-6、TNF-α、PCNA和Ki-67。观察肝脏排斥反应的ICAM-1、NFκB/p65和TGF-β₁。9.应用原位杂交技术检测肝脏组织的Y染色体,以证实受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。10.肝脏组织的HE染色、电镜和凋亡检测。观察肝脏织形态结构和排斥反应。结果:1.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生先增快（在减体积肝移植术后第2 d最明显）,后减慢,在术后第7 d,肝脏基本达到移植前受体的肝脏体积和质量。2.肝脏再生的过程中,C组中Y染色体的阳性率最高,B组次之,而A组的Y染色体的阳性率最低。3.大鼠减体积肝移植肝脏再生过程中,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平表现为先升高,后减低,即在术后第2 d,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平最高,而后降低。4.观察排斥反应时,血清中的IL-2和IFN-γ水平,A组最高,B组次之,C组最低;相反,IL-4和IL-10的水平,C组最高,B组次之,而A组最低。5.血清中的TGF-β₁表现为先升高,后降低。升高时,A组升高最快、最高,B组次之,C组升高得最慢、最低;降低时,A组降低的速度最快、降低最明显,B组次之,而A组下降最慢、减低的程度最小。肝脏组织中的TGF-β₁则表现为持续升高,以A组最为明显,B组次之,C组最低。6.肝脏组织的免疫组化ICAM-1、NFκB/p65、TGF-β₁,肝细胞凋亡以及HE染色等进一步证实了A组的组织局部的炎症反应最重,B组次之,而C组最轻。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生过程中,有骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。3.在大鼠减体积肝移植肝脏再生基本完全的基础上,撤除FK506后,C组发生的排斥反应程度最低,B组次之,而A组的排斥反应程度最重。4.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生诱导免疫低反应的原理可能与受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞以及机体的多因素共同参与了肝脏的再生过程有关系。