半夏(Pinellia ternata(Thunb．)．Breit．)为天南星科半夏属植物，是我国中药宝库中的大宗药材，已收入《中国药典》。半夏还是一种主要的出口创汇药材，目前国内外两个市场的年需求量为5,500吨～6,000吨，较20世纪90年代增长了50﹪以上。然而，多年来由于过度采集及环境的破坏，野生半夏资源已近枯竭，半夏原料供不应求，半夏伪品充斥市场，造成半夏用药的严重混乱和安全隐患。为解决供需矛盾和保护野生资源，我国从20世纪70年代开始半夏野生变家种及其栽培技术研究。在半夏规模化种植中，不少技术瓶颈如品质衰退、病害发生严重，增加了半夏栽培风险，其中软腐病的危害最为严重。为此，我们对半夏软腐病的病原及其发生情况进行了研究。 2005年对几个半夏主产地(山西、甘肃、山东、四川、浙江、安徽和江苏等)的主要种植基地进行了软腐病原的调查。对这些基地随机采集的半夏球茎进行细菌分离和致病性试验，结果从山西、甘肃、山东、四川、浙江、安徽、江苏和河南等地的半夏样品中分别获得52、63、57、69、55、66、51和53个分离物，其中同一地方的样品中有2-3种菌的分离频率较高。烟草过敏性试验表明，山西、甘肃、山东、四川、浙江、安徽、江苏和河南等地的分离物中分别有12、3、6、2、6、6、5和3个分离物可引起烟草产生过敏性反应；其中可引起半夏组织软腐的分离物分别有9、3、6、2、6、4，4和3个。可见，各种植基地的半夏样品均带有软腐病原菌。山西，甘肃，山东，四川，浙江，安徽，江苏和河南各种植基地半夏球茎的带病率分别为36﹪、12﹪、24﹪、8﹪、24﹪、16﹪、16﹪和12﹪。2006年从带病率较高的浙江、山西和山东种植基地采集发病样品进行病原菌的分离与鉴定。结果从浙江、山西和山东样品中分别获得8、12和13种细菌分离物。致病性试验表明，分离物SXR1、SXR2、SXR4、ZJR1、ZJR3、ZJR4、ZJR9、SDR1、SDR2、SDR5、SDR10使烟草叶片发生过敏性反应。其中，分离物ZJRl、SXRl和SDR1可使半夏球茎切片发生软腐，并伴随恶臭，发病率为100﹪。它们也可引起半夏植株发生与田间相似的软腐症状，主要表现为：植株出现水渍状坏死、倒伏、软化和腐烂，并伴随恶臭；球茎发生水渍状坏死、腐烂，最后只留下表皮空壳；根部出现半透明、软化和腐烂。无论是半夏组织还是植株，分离物ZJRl和SXRl引起的发病过程较快，SDRl发病则相对较慢。可见分离物ZJR、SXR和SDR1是引发浙江、山西和山东半夏软腐的病原菌。这3个病原菌对胡萝卜、萝卜，土豆，青椒、番茄、黄瓜、掌叶半夏和芋头也有浸染性，引起软腐病害，但对洋葱和生姜没有浸染性。应用传统方法和分子生物学方法对病原菌ZJR1、SXR1和SDR1进行了鉴定。从形态上，病原菌ZJR1、SXR1和SDR1与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种一致：菌落光滑、边缘整齐、稍凸起、半透明、有光泽，没有色素产生；革兰氏阴性杆菌，周生鞭毛。生理生化特征方面，3个病原菌与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种基本相似，除了3个病原菌的最高生长温度(39℃)高于己报道的胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种菌株，以及对几种碳源的利用情况不同。BIOLOG系统鉴定结果表明，病原菌ZJR1和SXR1对95种碳源的利用情况相同；病原菌ZJR1、SXR1和SDR1与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种最相似，相似性分别为61.6﹪、63.5﹪和66.9﹪；但它们与该亚种的部分碳源利用情况有所不同，表明它们既相关又相区别。脂肪酸成分分析(MIDI鉴定系统)也表明，3个病原菌与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种的相似性最大，分别为72.9﹪、78.2﹪和77.9﹪，但它们的主要脂肪酸比值却与之不同。16S rRNA基因序列同源性分析表明，病原菌ZJRl和SXRl与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种的同源性最大，但仅为97.6﹪，不在一个种的界定范围。邻近法(NJ)、最大相似法(MP)和最大简约法(ML)所构建16S rDNA序列的系统发育树，也表明这2个病原菌与胡萝卜果胶杆菌亲缘关系相近，其中与P．carotovorum subsp．carotovorum 和 P．carotovorum．subsp．odriferum亚种最近，但自成一簇。PCR-RFLP鉴定结果表明病原菌ZJR1和SXR1与P． carotovorum subsp．odriferum不相关，而与P．carotovorum subsp．carotovorum相关。以上生理生化和分子生物学鉴定结果均表明，病原菌ZJR1、SXR1和SDR1与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种高度相关，但又与之区别，我们推测这些病原菌是胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种的变种。 为探索半夏软腐病的生物防治途径，研究了几种抗生素对病原菌ZJR1、SXR1和SDR1的拮抗效果，同时进行了拮抗内生菌的分离和筛选。结果，氨苄青霉素和井岗霉素对3个病原菌的拮抗效果最强，青霉素和链霉素次之，这为选用抗生素防治提供了一些依据。从各地半夏球茎中分离出12株有一定拮抗效果的内生菌，其中2株内生菌的拮抗效果较强，初步显示了内生菌在半夏软腐病生物防治中的潜在作用。显然，为获得对高效拮抗内生菌，应进行广泛的筛选和深入研究。