菊花(Chrysanthemum morifolium)是我国的传统名花,具有较高的商品价值,是出口创汇的重要农产品之一。近年来,菊花产业链不断拉长,与乡村旅游、乡村振兴等深度融合,菊花种质资源培育和经济开发效果显著,成为农业经济发展一个新的增长点。然而,在菊花栽培过程中,低温高湿的设施栽培环境极易引起菊花白色锈病的大规模爆发,甚至导致菊花死亡,严重影响其观赏品质并带来经济损失。实践证明,防治菊花白色锈病发生的最有效手段是明确其抗病机制并选育抗病品种。本研究以菊花白色锈病抗病品种‘C029’为试验材料,利用前期克隆获得的抗菊花白色锈病差异表达基因CmWRKY15-1,构建VIGS沉默载体并瞬时转化菊花,实现目的基因有效沉默,验证其在菊花抗白色锈病中的功能,了解其作用机制,为菊花抗性育种提供依据。主要研究结果如下:1.采用烟草脆裂病毒(TRV)为病毒载体,以菊花抗病品种‘C029’叶片cDNA为模板,在CmWRKY15-1基因序列保守区域以外设计引物,扩增得到216 bp的沉默片段,测序正确后将其插入p TRV2载体Eco RI和Bam HI双酶切位点之间,构建p TRV2-CmWRKY15-1重组载体并利用冻融法转入农杆菌感受态EHA105。2.以菊花‘C029’组培苗为受体,利用沉默表达载体p TRV2-CmWRKY15-1,通过农杆菌渗透法瞬时转化菊花,通过病毒检测、半定量以及荧光定量检测共获得10组有效沉默植株,其表达效率约为正常水平的25.1%-51%,为下一步验证CmWRKY15-1基因在菊花抗白色锈病中的功能提供试验材料。3.为进一步验证CmWRKY15-1基因在菊花抗白色锈病中的功能,分别对WT和沉默植株接种菊花白色锈病病原菌。接菌处理后,WT中SA合成基因PAL和ICS1相对表达量显著上升,而沉默植株中SA合成基因表达受抑制,表明CmWRKY15-1基因可能通过参与SA合成调控响应菊花白色锈病。通过对SA通路标志基因进行q RT-PCR表达分析发现,沉默植株中NPR1、PR1表达明显受抑制,表明CmWRKY15-1沉默会抑制SA通路防御相关基因的表达。