铁稳态失衡对鸡肝脏物质代谢和炎症的影响

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铁作为机体必不可少的微量元素,参与细胞代谢、DNA合成和血红蛋白合成等生理过程,其摄入过多或不足都会对机体产生不利影响。NRC(1994)蛋鸡饲养标准规定褐壳蛋鸡饲料配方中铁含量应达到56~75 mg/kg,我国蛋鸡饲养标准规定饲料中铁含量需达到60~80 mg/kg。在实际生产中,为了提高蛋鸡的生产性能,一般会在基础饲粮中额外添加铁。但是在我国的一些饲料添加剂中,添加Fe SO4在300~3000 mg/kg之间,致使饲料中的铁含量远超过实际需求量。当铁供给超过铁需求时会引起机体铁超载,不仅对机体产生毒性,而且随粪便排出的多余的铁还可能造成环境污染。肝脏是机体铁稳态的主要调控器官,铁代谢紊乱不仅会影响全身铁稳态,还会对肝脏造成损害。为了揭示铁超载导致鸡肝脏损伤的机制,我们从氧化应激、糖脂代谢紊乱、胆汁酸代谢紊乱和炎症的角度进行了如下研究:将60只1日龄的海兰褐蛋鸡随机分为对照组(C组,饲喂含139 mg/kg铁的基础饲粮),低剂量组(L组,在饲喂基础饲粮的基础上额外添加450 mg/kg铁),中剂量组(M组,在饲喂基础饲粮的基础上额外添加750 mg/kg铁),和高剂量组(H组,在饲喂基础饲粮的基础上额外添加1050 mg/kg铁)。试验7周后采集血液和肝脏组织进行以下试验,并得出相关结果。首先,用试剂盒检测蛋鸡血清中的血清铁和血清铁蛋白水平,结果显示血清中铁含量随日粮铁水平的增加而上升,表明机体铁含量随日粮铁水平呈剂量依赖性增加;用普鲁士蓝染色和组织铁检测试剂盒对肝脏中铁含量进行检测,用蛋白免疫印迹检测肝脏铁代谢相关蛋白的表达水平,包括TFRC、DMT1、FPN1、FTH、FTL、IREB2和FBXL5,结果发现日粮中高铁水平导致肝脏铁含量增加,铁吸收减少,储存和排出增多,表明日粮中高铁水平导致肝脏铁超载。第二,肝脏病理组织学观察结合血清中肝功能相关指标检测,结果显示铁超载导致肝脏组织结构受损,血清中肝损伤指示酶升高、蛋白质和胆红素代谢障碍,提示肝功能受损;用试剂盒检测肝脏氧化应激标志指标包括T-SOD、CAT和MDA,结果发现铁超载导致肝脏抗氧化酶减少和脂质过氧化产物增加,表明铁超载导致肝脏发生氧化应激。第三,用实时荧光定量PCR检测肝脏糖脂代谢相关基因的表达水平,包括PPAR-α、LPL、CPT1A、PNPLA2、SCD-1、FASN、GPAM、PPAR-γ、GLUT2、GLUT8、G6PC和PEPCK。结果发现铁超载导致肝脏脂质合成增加,脂质分解减少,糖异生增加,表明铁超载导致肝脏糖脂代谢紊乱;用实时荧光定量PCR检测肝脏胆汁酸代谢相关基因的表达水平,包括CYP7A1、CYP7B1、CYP8B1、BAAT、FXR、BSEP和NTCP,结果发现铁超载导致肝脏胆汁酸合成减少,输出增加,表明铁超载导致肝脏胆汁酸代谢紊乱。第四,用蛋白免疫印迹检测肝脏中炎症相关蛋白的表达水平,包括i NOS、NF-κB、TNF-α和COX-2;用实时荧光定量PCR检测肝脏中炎性细胞因子的表达水平,包括IL-1β、IL-6、IL-10和IL-18。结果发现铁超载导致肝脏炎症相关蛋白和基因的表达水平升高,表明铁超载导致肝脏炎症反应。结论:日粮中的铁水平过高导致蛋鸡肝脏铁超载,铁超载介导的氧化应激导致蛋鸡肝脏发生糖脂代谢紊乱、胆汁酸代谢紊乱和炎症。
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