类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的自身免疫性疾病,致残性强,可导致不可修复的关节畸形、破坏及功能丧失。肿瘤坏死因子-α(TNF-α,Tumor Necrosis Factor-alpha)在RA病变的滑膜组织增生、自身免疫反应和炎症等生理病理过程中起着重要作用,处在细胞因子调节网络的顶点,是RA发病机制中处于关键位置的促炎性因子。TNF-α的拮抗剂已被证明是类风湿关节炎的有效治疗剂,但缺点是靶向性低,副作用多。含额外结构域B的纤维连接蛋白(Extra-domain B of fibronectin, ED-B FN)在RA患者的关节炎滑膜中呈现特异性表达。因此,以ED-B FN单克隆抗体或抗体片段作为靶向载体,与TNF-α单克隆抗体或抗体片段连接,构建抗TNF-α抗ED-B FN的双特异性抗体(Bispecific antibody)αEBTA,在RA的靶向治疗中能降低或消除其对正常组织和关节的免疫抑制作用,能有效提高药物的靶向性和安全性。本研究通过由基因工程方法构建的毕赤酵母菌,分泌表达双抗aEBTA,上清中双抗的浓度为3μg／mL,经过镍离子亲和层析后,浓度达到了0.3mg/mL。对其进行了体外药效分析,AIA(佐剂诱导型)模型小鼠药代动力学和药效学研究。并由结果分析出双抗aEBTA能对抗TNF-a的细胞毒作用；双抗在类风湿关节模型(AIA)小鼠炎症关节中呈现特异性聚集,浓度比在其他器官(肝、肾、脾、肺)有显著差异；药效学实验表明双抗对AIA小鼠有较好的治疗效果。结论：双抗aEBTA对AIA小鼠炎症关节有靶向分布和较好的治疗效果,为以后相关药物的应用和开发打下了很好的基础。