前言　　白藜芦醇(Resveratrol，RSV)是植物在恶劣环境下或遭到病原体侵害时，自身分泌的一种可抵御霉菌感染的多酚类抗毒素。具有抗血小板聚集、诱导肿瘤细胞凋亡、提高免疫功能、抗炎、抗氧化、降血脂、抗衰老等多种生理活性。　　同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是蛋氨酸(Methionine，Met)循环的正常代谢产物，是能量代谢的重要中间产物。Hcy的水平升高，会产生一系列不良反应，其中以诱发心脑血管病变最受关注。此外，对肝细胞的损伤和变性也有影响。　　自由基在机体内有很强的氧化反应能力，且易产生连锁反应，从而导致机体的衰老。研究表明，RSV可通过抗氧化途径来延缓机体的衰老。氧化应激既是加速机体衰老的重要原因，也是许多疾病如高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia，HHcy)、肝脏和血管损伤的病理基础。目前的研究认为，HHcy是心脑血管疾病的独立危险因素。HHcy诱导的氧化应激反应产生的氧自由基可能参与动脉粥样硬化过程。而RSV的抗氧化作用可能能改善Hcy的氧化应激毒性。　　目前，对RSV的相关生物学功能的研究中，多采用45mg/kg.bw.d，而本课题前期研究，22.5mg/kg.bw.d也具有明显的生物学效应。为此本研究采用两个剂量RSV对拟衰老模型小鼠进行预防性干预，以观察RSV对小鼠血浆Hcy水平和机体氧化应激状态的影响以及是否存在剂量反应关系，旨在探讨RSV能否通过降低血浆Hcy的水平来发挥其抗衰老作用，以期为进一步研究RSV延缓衰老提供一定依据。　　材料和方法　　一、动物的分组与喂养　　16w龄SPF级雄性昆明种小鼠72只，体重35-40g，由中国医科大学实验动物中心提供。适应性喂养1w后，按体重随机分为基础组、衰老组、干预Ⅰ组和干预Ⅱ组，每组18只。基础组每日颈背部皮下注射生理盐水，其余三组注射200mg/L的D-半乳糖(D-galactose，D-gal)溶液。基础组和衰老组每日给予0.5％的羧甲基纤维素钠溶液灌胃，干预Ⅰ组和干预Ⅱ组分别给予22.5mg/kg.bw.d和45mg/kg.bw.d的RSV溶液灌胃。小鼠饲养过程中，采取每笼5-6只，温度22±2℃，湿度40-70％，自然光照，自由摄食饮水，每周称量体重2次，饲养16w。饲料由中国医科大学实验动物中心提供。　　二、测定指标及方法　　于第16w末，每组随机抽取12只小鼠，测定血浆Hcy、肝脏和血清氧化应激指标，每组余下的6只小鼠，灌流固定观察动脉病理学改变。　　（一）Hcy的测定（高效液相色谱法）　　样品处理:摘眼球取血置于2mlEP管中，离心15min，3000r/min，取上清备用。　　取100μl血清和200μl乙腈于1.5mlEP管中，涡旋30s，离心10min，13000rpm，吸取上清250μl，氮气吹干(40℃)，加入缓冲液200μl和丹黄酰氯200μl，涡旋30s（避光），65℃避光衍生25min，过滤，进样10μ1。　　（二）氧化应激指标　　将小鼠乙醚麻醉，摘眼球取血，离心分离小鼠血清;解剖取200mg肝组织，匀浆;分别测定下列指标:　　谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-PX):二硫代二硝基苯甲酸法　　超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD):黄嘌呤氧化酶法　　丙二醛(Maleicdialdehyde，MDA):硫代巴比妥酸法　　总抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity，T-AOC):按照试剂盒说明测定;　　（三）病理切片　　采用4％多聚甲醛固定液灌流后，分离取下小鼠颈动脉和肝脏，浸泡24h，石蜡包埋、切片，HE染色，在显微镜下观察动脉和肝脏的病理改变。　　三、数据处理和统计分析　　用SPSS13.0统计软件进行数据分析，实验结果用(X)±S表示，用方差分析比较不同干预组各指标间的统计学差异。检验水准:α=0.05。　　结果　　一、小鼠一般状态观察　　基础组小鼠活泼好动、毛发光亮而浓密、皮肤弹性好;衰老组小鼠表现出少动、行动迟缓、毛色发黄、稀疏并渐有脱毛现象，皮肤松弛、弹性下降;干预组小鼠总体状态好于衰老组。　　二、血浆同型半胱氨酸水平　　与基础组比较，衰老组小鼠血浆Hcy水平升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与衰老组比较，干预组小鼠血浆Hcy水平下降(P＜0.05)。两个干预组之间没有统计学差异（P＞0.05）。　　三、氧化应激指标　　与基础组比较，衰老组小鼠血清和肝脏SOD、T-AOC和GSH-Px活性均降低，MDA含量升高，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。与衰老组比较，干预组小鼠血清和肝脏SOD、T-AOC和GSH-Px活性均升高，MDA含量下降，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。两个干预组之间没有统计学差异（P＞0.05）。　　四、病理切片　　1、动脉病理切片　　基础组动脉内膜完整，细胞排列整齐，结构清晰;衰老组动脉内膜略增厚，动脉壁层次欠清晰，形态不规则，向管腔内突起，平滑肌细胞增殖，平滑肌细胞和弹性纤维排列紊乱，炎性细胞浸润。两个干预组与基础组相似，动脉内膜基本完整。　　2、肝脏病理切片　　基础组小鼠肝细胞形态正常，胞核清晰，胞浆丰富，间质无水肿;衰老组小鼠肝细胞发生变性，体积变小，胞核与胞浆界限模糊，核固缩成三角形或不规则形;与衰老组相比，干预组小鼠仍有不同程度的肝细胞变性，但变性细胞数量显著减少;干预Ⅱ组与干预Ⅰ组小鼠肝细胞染色结果基本相同。　　结论　　1、RSV干预组小鼠血浆Hcy水平低于衰老组，接近基础组;　　2、RSV干预组小鼠血清和肝脏SOD、T-AOC、GSH-PX均高于衰老组，MDA低于衰老组;接近基础组;　　3、RSV干预组小鼠动脉和肝脏损伤较衰老组轻微，接近基础组;　　4、干预Ⅰ组(22.5mg/kg.bw.d)与干预Ⅱ组(45mg/kg.bw.d)比较，各指标均未出现统计学意义，22.5mg/kg.bw.d更适用于实际应用中。