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目的 1、了解中国沈阳地区献血员中人类疱疹病毒8(HHV-8)DNA的检出情况，探讨不同性别、民族、血型以及不同年龄段之间HHV-8 DNA检出率的差异。 2、检测淋巴瘤、白血病和多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)、骨髓单个核细胞(BMMCs)、骨髓活检标本和淋巴瘤标本中HHV-8 DNA，并同时检测外周血T淋巴细胞亚群，探讨HHV-8与这些疾病的相关性及与机体免疫状态之间的关系。 3、检测多发性骨髓瘤患者血清白介素6(IL-6)的含量，并探讨HHV-8与IL-6之间的相关性。 材料和方法 1．标本收集 (1)献血员和正常对照：采集正常献血员标本110份，并从中分离PBMCs110份，抗凝血30份，血清30份。收集反应性增生淋巴结标本20份。非血液系统疾病患者BMMCs15份。正常肋骨骨髓活检标本15份。 (2)淋巴瘤患者：收集44例淋巴瘤患者外周血36份，BMMCs12份，淋巴瘤病理标本29份。 (3)白血病患者：68例急性白血病患者收集外周血标本54份，BMMCs 32份。13例慢性白血病患者收集外周血标本6份，BMMCs9份。 (4)多发性骨髓瘤患者：26例MM患者收集外周血标本20份，BMMCs24份，骨髓活检标本16份。并分离血清20份。 2．DNA提取以及DNA浓度测定与调定 (1)外周静脉血和骨髓穿刺标本以Ficoll-Hypaque分离出PBMCs和BMMCs。 (2)以经典的酚—氯仿抽提法提取献血员PBMCs以及淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者的PBMCs、BMMCs、淋巴瘤／淋巴结病理标本和骨髓活检标本中的DNA。 ＊）提取的 DNA用紫外分光光度计测定 260urn和 280urn的光密度 （OD人 并根据此 OD值计算 DNA的浓度和纯度，然后用 TE缓冲液调浓度至IHg／ml。 3．引物设计 采用以 WS特异性 KS330 Burn片段为模板的引物对 KSI／KSZ。 4．PCR扩增 用KSI／KSZ引物对做PCR扩增以检测献血员PBMCs，以及淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者PBMCS、BMMCS、淋巴瘤病理标本及骨髓活检标本中的 WS KS330片段。 5．PCR产物的回收 用 DNA片段回收试剂盒回收以 KSI／KSZ扩增的 233hp产物，用于限制性内切酶分析。 6．PCR产物的酶切鉴定 KS lffeSZ扩增出的233hp产物用限制性内切酶PStl作酶切分析鉴定。 7．流式细胞促检测T淋巴细胞亚群 应用 CD3－PE、CD4－FITC、CDS－FITC鼠抗人单克隆抗体和流式细胞仪检测献血员、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者外周血T淋巴细胞亚群。 8．ELISA法检测血清＊－6水平 用人几场定量ELA试剂盒检测献血员及多发性骨髓瘤患者血清IL6含量。 9．检测结果的统计学分析 ＊）不同性别、民族、血型和不同年龄段献血员的HHVS DNA检出率差异以及淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者 HHVS DNA检出率与正常对照的差异用 X‘检验进行比较分析。 m淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果与正常对照的差异以及多发性骨髓瘤患者血清IL6含量与正常对照的差异用 student t检验比较分析。 2 结 果 1．Ilili血员中 HHVS DNA检测结果 应川H＊VS＊S 330二物作 ＊＊R检测令员门10名。【－。囚沈阳上 区献 山！U＊B＊Q小日HV8＊＊A检出率为6．4％。其卜男性献血员为8．8％，女们一人2．4％；A划献血员为3．3％，B型为6二％，O型为8．3％，＊B型为9．1w；；汉族就n山为6．1％，满族为14．3％，们鲜族，蒙古族和锡伯族为0。纤统训一学分析，小同性别。血型、比族以及不同年龄段献血员的＊＊＊8＊＊A价门t率没。上人著性差异。但＊＊VSD＊A检出率方伽着献血员年龄增加而逐渐增高的 旺势。 2．淋巴瘤、白血病 多发性骨髓淑岱者 HHVS DNA检测结果 问）淋c瘤患者：44例淋巴瘤患片中有6例检出＊＊V 8＊＊A。患肯PBMCS、BMMCS和淋巴瘤9内地标本 HHVS DNA检出率分别为 5．6％、8．3％和17．2％。经统计学分析，与对照组没有显著性差异。但是淋巴瘤和淋u结病理标小与PBMCS、BMMCS肚c，HHVS检出率有增高倾向。 C）王卜【对例患者：急性白血刑患者 PBMCS和 BMMCS。11 HHVS DNA俭f卜率＊ 别为7巴4％不9邑4％子 慢性白血9 患者＊8＊＊ 和B＊＊＊ 叶J均未J 酉fIHVS DNA。经统计学分析与正常对照组没有显著性差异。 ＊）多发性骨髓瘤患者：患者PB MCS、BMMCS、骨髓活检标本中HHVSDNA的lft 11＿11率分别为15％、12．5％和62．5％。经统计学分析，MM ！＆者PBMCS和 BMMCS：fi HHVS DM检出率与对照组比较没有显著性差异。MM以开q。跑活检标本中HHVS检出率与对照组相比有显著性差异。 3．淋u球 白血病、多发性骨髓瘤患者T淋巴细胞亚群检测结果及与HHVS表达之间的关系。 门）秆 u都患者：淋巴留恋者 CD4细胞、CD4／CDS比值低 于正常对J以，C＊8细胞；高于正常对照。统计学分析有显著性差异。＊＊3细胞无明显变化。HHVSI川。【生组CD4细胞，CD4／CDS