论文部分内容阅读
目的:菊花是菊科菊属植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat)的干燥头状花序,性味甘、苦,微寒。归肺、肝经,具有平肝明目,清热解毒的功效。《本草纲目》中记载菊花“作枕明目”,民间也常用菊花枕来预防失眠,然而菊花治疗失眠的作用鲜有研究。开封菊花历史悠久,但主要在观赏、培育方面研究较多,而对开封菊花的药用价值研究较少。睡眠障碍是常见病、多发病,其主要表现为失眠症。本研究通过建立小鼠PCPA失眠模型,探究开封菊花KFC-6水提物、醇提物、挥发油对失眠模型小鼠的镇静催眠作用及机制。方法:以开封菊花KFC-6为研究对象,采用水提法制备菊花水提物;以95%乙醇为溶剂,采用醇提法制备菊花醇提物;采用水蒸气蒸馏法制备菊花挥发油。通过腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA,300 mg/kg)建立失眠小鼠模型。采用灌胃和吸入两种不同的给药方式,通过自主活动实验、睡眠实验,探究菊花KFC-6水提物、醇提物、挥发油的镇静催眠作用。通过体温测定、Morris水迷宫实验、倾斜板实验、牵引实验,评价菊花KFC-6水提物、醇提物、挥发油对失眠模型小鼠体温、学习记忆能力、运动协调能力、肌肉松弛的影响。通过ELISA法,测定小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子水平,测定脑组织中5-HT、5-HIAA、NE、DA等单胺类神经递质水平及Glu、GABA等氨基酸类神经递质水平,初步探究开封菊花KFC-6提取物对失眠模型小鼠的镇静催眠作用机制。结果:开封菊花KFC-6水提物、醇提物和吸入挥发油均能够降低失眠模型小鼠自主活动次数,延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。其中水提物高剂量(WFC-H)组和吸入挥发油高剂量(INH-EO-H)组效果较好。与模型组比较,WFC-H组小鼠自主活动次数降低至82.90±36.48(P<0.05),睡眠时间延长至153.80±23.05 min(P<0.01);INH-EO-H组小鼠自主活动次数降低至86.29±32.65(P<0.05),睡眠时间延长至169.90±30.29 min(P<0.001)。与模型组比较,WFC-H组、INH-EO-H组在倾斜板上停留时间分别增加至56.18±5.83 s(P<0.001)、52.29±13.17 s(P<0.01),在牵引实验中的牵引时间分别增加至50.25±12.03 s(P<0.01)、49.00±14.24 s(P<0.05)。与模型组比较,WFC-H组、INH-EO-H组小鼠体温无明显变化,Morris水迷宫实验中小鼠逃避潜伏期、目标象限游泳时间、穿越平台次数均无明显差异。与地西泮组比较,WFC-H组、INH-EO-H组停留时间、牵引时间和穿越平台次数均显著增加。菊花KFC-6水提物、醇提物和挥发油能够调节脑组织中单胺类、氨基酸类神经递质,其中,与模型组比较,WFC-H组、INH-EO-H组5-HT水平分别升高至120.89±8.33 ng/m L(P<0.001)、118.59±7.91 ng/m L(P<0.001),NE水平分别降低至0.14±0.02 ng/m L(P<0.001)、0.19±0.03 ng/m L(P<0.001),血清中TNF-α水平分别降低至191.95±4.28 pg/m L(P<0.01)、193.68.18±6.17 pg/m L(P<0.01)。此外,与模型组比较,WFC-H组、INH-EO-H组均能够提高脑组织中氨基酸类神经递质Glu水平,而对GABA水平无明显影响。结论:开封菊花KFC-6水提物、醇提物、吸入挥发油对PCPA失眠模型小鼠均具有镇静催眠作用,且能够增强小鼠运动协调能力、改善小鼠肌肉松弛,而对小鼠体温、学习记忆功能无影响,其中WFC-H组和INH-EO-H组镇静催眠效果最好。比较不同给药方式挥发油的镇静催眠作用发现,吸入挥发油的镇静催眠作用明显优于灌胃挥发油。与地西泮比较,WFC-H、INH-EO-H组均无明显的不良反应,具有一定优势。菊花提取物的镇静催眠作用机制可能通过参与5-HT能系统,提高5-HT改善慢波睡眠,降低NE水平,增加快波睡眠,抑制大脑兴奋性,降低脑内维持觉醒功能来实现,也可能通过降低TNF-α水平参与睡眠调节机制。