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目的:研究白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对小鼠T淋巴细胞体外增殖及活化诱导细胞死亡(AICD)的影响,并初探其免疫抑制机制。方法:1.富集小鼠脾脏T淋巴细胞:利用免疫磁珠分选技术,无菌分离C57BL/6小鼠脾脏T淋巴细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞纯度。2.TGP对活化诱导T淋巴细胞死亡(AICD)的影响:将纯化后的T淋巴细胞悬液接种到24孔板中,7.5×l0~5个/孔,按照TGP溶液终浓度(0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml)设为空白组、TGP低中高剂量组,anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞活化,培养24h或48h后采用AnnexinV/7AAD染色检测细胞活性。3.TGP对小鼠T淋巴细胞增殖的影响:利用CFSE标记T淋巴细胞,然后将CFSE标记的T淋巴细胞接种到24孔板中,7.5×10~5个/孔,按照TGP溶液终浓度(0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200 ug/ml)设为空白组、TGP低中高剂量组,anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞增殖,培养48h后,收集细胞进行流式检测,计算活细胞分裂代数和比例。4.TGP对活化T淋巴细胞Fas或FasLmRNA表达的影响:纯化的CD4+T淋巴细胞接种于24孔板中,7.5×1 05个/孔,设空白组和中浓度组(100ug/ml),anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞活化,24小时后收集细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA,RT-PCR检测Fas或FasL mRNA相对表达量。5.TGP对活化T淋巴细胞表面Fas或FasL蛋白表达的影响将纯化后的T淋巴细胞悬液接种到24孔板中,7.5×10~5个/孔,按照TGP溶液终浓度(0ug/ml、100 ug/ml、200 ug/ml)设为空白组、TGP中、高剂量组,anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞活化,培养24h后,收集细胞,染色后流式检测T淋巴细胞表面Fas或FasL表达量。6.TGP对细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响CD4+T淋巴细胞接种于24孔板中,7.5×10~5个/孔,设空白组和中、高浓度组(100ug/ml、200ug/ml),anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞活化,24小时后收集细胞,Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达。结果:1.TGP可显著促进T淋巴细胞AICD作用流式结果显示:TGP处理24小时后,与空白组相比,高剂量组活细胞比例显著降低;而TGP处理48小时后,中、高剂量组活细胞比例均较空白组显著降低。2.TGP可显著抑制T淋巴细胞增殖流式结果显示:TGP处理48小时后,与空白组相比,TGP低中高剂量处理组细胞分裂代数和分裂细胞比例显著降低,且该作用具有药物浓度依赖性,高浓度时细胞增殖可被完全抑制。3.TGP可通过增加Fas的表达促进T淋巴细胞AICDRT-PCR结果提示:中剂量TGP处理CD4+T淋巴细胞后,Fas mRNA表达量明显升高。流式结果提示:TGP中、高剂量处理组活化T淋巴细胞表面Fas表达量较空白组显著增加。4.TGP抑制活化T淋巴细胞Bcl-2蛋白表达Western Blot结果提示:与空白组相比,TGP处理组Bcl-2蛋白表达下调,且浓度越高降低越明显。结论:1.TGP可显著抑制小鼠T淋巴细胞体外增殖,并促进活化诱导的T淋巴细胞死亡(AICD)。2.TGP可通过上调Fas表达量、下调Bcl-2表达加速活化T淋巴细胞AICD作用。