[研究背景]自体皮片移植术是整形外科常见手术,然而术后常见植皮区过度色素沉着,主要原因是植皮区皮肤表皮内黑色素的含量上升,尤其在颜面部和四肢暴露部位,严重影响了患者的心理健康和社会交往,其机制机理目前仍不清楚,一直是临床工作难以解决的问题。[研究目的]通过检测豚鼠腹部自体全厚皮片移植术后植皮区过度色素沉着皮片中黑色素含量与蛋白酶激活受体2,以及抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂观察移植皮片中黑色素沉着改变情况,探讨蛋白酶激活受体2在自体全厚皮片移植后过度色素沉着的作用。进一步阐述自体全厚皮片移植后过度色素沉着的机制机理。[研究方法]将白色、棕黄色、黑色豚鼠共30只分成甲、乙、丙三组,每组各10只,行自体全厚皮片移植,观察自体全厚皮片移植后2周至16周不同时间点移植皮片中的黑色素的含量变化情况,筛选出自体全厚皮片移植后过度色素沉着的理想模型。采用免疫组化、western-blot、Realtime qPCR方法检测蛋白酶激活受体2在自体移植过度色素沉着皮片中和正常皮片中的表达的差异。将黑色豚鼠过度色素沉着移植皮片右边皮片分设A组,为实验组；左边皮片设为B组；为对照组。实验组使用蛋白酶激活受体2的活性抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂50μmol/L浓度涂抹于移植后过度色素沉着的皮片,对照组使用安慰剂(乙醇与丙醇按体积比为70：30的混合物)涂抹,每天3次,每周7天,4周后采用Masson-Fontana黑色素染色方法和软件image pro-plus 6.0观察和分析皮片中黑色素含量变化。[研究结果]1、白色豚鼠术后第2至16周移植皮片中黑色素平均光密度值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),棕黄色豚鼠术后2、3周移植皮片中黑色素平均光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),第4至16周比较差异无统计学意义(P>0.05),黑色豚鼠术后2、3、4周移植皮片黑色素平均光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),第8至12周差异无统计学意义(P>0.05),第16周与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2、免疫组化结果：黑色豚鼠自体全厚皮片移植后过度色素沉着皮片中表皮及毛囊中角质形成细胞中蛋白酶激活受体2的表达明显要高于正常对照皮片。3、Western-blot结果：黑色豚鼠自体全厚皮片移植后过度色素沉着皮片中蛋白酶激活受体2的表达明显要高于正常对照皮片。4、Realtime-PCR结果：黑色豚鼠自体移植过度色素沉着皮片中蛋白酶激活受体2的基因表达较正常对照皮片比较差异有统计学意义(P<0.05)。5、黑色豚鼠过度色素沉着移植皮片使用蛋白酶激活受体-2抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂涂抹4周后,移植皮片中黑色素平均光密度值与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。[研究结论]1、通过三种不同颜色豚鼠的自体全厚皮片移植后色素沉着的观察,发现黑色豚鼠在自体皮片移植后16周时出现了自体全厚皮片移植后过度色素沉着。黑色豚鼠是自体全厚皮片移植后过度色素沉着的理想模型。2、通过大体观察、Masson-Fontana黑色素染色法、免疫组化、western-blot、realtimeqPCR的方法发现黑色豚鼠自体全厚移植皮片过度色素沉着皮片中黑色素含量较正常皮片含量增加、PAR-2蛋白及基因表达较正常皮片上调。且在使用蛋白酶激活受体2活性抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂涂抹4周后皮片中黑色素含量下降。3、自体全厚皮片移植后过度色素沉着与PAR-2表达上调有关。PAR-2的过量表达在自体移植皮片过度色素沉着中起了重要的作用。这可能是自体全厚皮片植皮后过度色素沉着的一种新机制。