组织工程化软骨细胞—生物载体复合物修复骺板损伤

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由于创伤、感染、肿瘤以及发育障碍造成的骺板损伤,会引起骨骺与干骺端之间形成骨桥,骺板全部或部分提前闭合,造成肢体短缩和(或)成角畸形,影响儿童生长发育。Langenskiǒld报道手术切除骨桥后用自体脂肪、骨水泥等非软骨类材料填充只对小于30%的骺板缺损有效,改进生长板修复方法和寻找更好的植入材料仍是小儿四肢矫形外科面临的一大难题。近年来,新兴的组织工程学技术为这一问题的解决带来了契机,本实验将骨髓中的间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为软骨细胞,再与生物载体外消旋聚乳酸(PDLLA)复合修复兔骺板缺损,为临床治疗骺板缺损探索一种新方法。 目的: 1、提取兔骨髓中MSCs并加以纯化,在体外培养条件下观察其生物学特性,探讨其作为组织工程种子细胞的可能性。 2、将MSCs在特定条件下定向诱导分化为软骨细胞,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性。 3、MSCs再与生物载体PDLLA复合,三维立体培养体外构建组织工程化软骨组织。 4、进一步探讨此复合物修复兔骺板损伤的可行性。 方法: 1、从兔骨髓中提取MSCs,体外培养扩增,再以相差显微镜观察并绘制生长曲线。 2、MSCs先在含生长因子TGF-β1、地塞米松等的无血清培养基诱导下单层培养,后在PDLLA三维培养条件并加入IGF-Ⅰ,定向诱导向软骨细胞分化。 3、MSCs与PDLLA复合物,回植入8周龄兔胫骨上端骺板缺损模型中,术后4、8、16周时对双下肢行大体观察、X线摄片、组织学检查,评价此复合物修复兔骺板损伤的效能。 结果: 1、原代培养及传代培养显示,自体骨髓MSCs存活率为90%~95%,并具有活跃的增殖倍增能力。 2、兔骨髓MSCs在三维培养条件、无血清培养基中诱导分化后,甲苯胺蓝染色,可见细胞周围有大量的甲苯胺蓝异染性基质。 3、兔胫骨上端生长板缺损区移植培养软骨4周时,胫骨无明显畸形发生,组织学检查显示生长板缺损由软骨充填;16周时实验组胫骨出现轻度畸形,组织学检查显示生长板已近闭合。但是对照组出现严重的畸形,生长板己闭合。 结论: 1、骨髓MSCs体外培养成功,为今后利用自体间充质干细胞通过组织工程学方法修复软骨、骨、肌肉系统的组织缺损奠定了基础。 2、MSCs在三维培养条件、无血清培养基中定向诱导分化为软骨细胞。 3、PDLLA是较为理想的软骨组织工程载体,三维立体培养有利于细胞的勃附、生长和功能发挥 4、MSCs与生物载体复合可形成组织工程化软骨组织,植入体内可替代缺损的生长板软骨组织,减轻髓板损伤后肢体短缩与成角畸形,为临床治疗箭板缺损探索了一种新方法。
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