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目的:观察氯化钴诱导缺氧离体星形胶质细胞、前脑缺氧大鼠及缺血性脑卒中病人HIF-1α、SDF-1α的表达情况及相关性。
方法:
1、离体星型胶质细胞培养、鉴定,分别用不同终浓度氯化钴培养星型胶质细胞4小时,以未加入氯化钴培养组作为对照组。构建HIF-1αsiRNA,用ELISA法检测HIF-1αsiRNA干扰缺氧后不同时间点SDF-1α蛋白含量。
2、采用2VO制作大鼠前脑缺血模型,模型成功24只SD大鼠随机分成4组,术后第1、7、14、30天取大鼠前脑皮质,选择6只假手术组作为对照组。
3、选取临床确诊缺血性脑卒中病人24人,分为4组,每组6人,依次在发病的第1、7、14、30天采外周静脉血,选取同期门诊健康体检人员6人作为对照组;
4、RT-PCR检测各组缺氧模型HIF-1α mRNA和SDF-1α mRNA的表达。
结果:
1、体外培养星型胶质细胞,经GFAP免疫荧光及DAB显色,符合星型胶质细胞特征。对照组HIF-1α表达很弱甚至不表达,而SDF-1α有一定的表达。不同氯化钴浓度组较对照组HIF-1α表达有统计学意义(P<0.05)。100mmoml/L、150mmoml/L、200mmoml/L氯化钴培养的胶质细胞SDF-1α的表达较对照组有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α siRNA干扰后,HIF-1α、SDF-1α表达下降。HIF-1α和SDF-1α表达时相一致,具有正相关性。
2、生理情况下SD大鼠体内,HIF-1α表达很弱甚至不表达,而SDF-1α的有一定的表达。术后1、14天较对照组HIF-1α的表达差异有统计学意义(P<0.05),术后7天、14天较对照组SDF-1α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。术后30天较对照组HIF-1α、SDF-1α的表达差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、7天HIF-1α持续高表达,7、14天SDF-1α持续高表达,SDF-1α高表达时相滞后HIF-1α,HIF-1α和SDF-1α表达时相一致,具有正相关性。
3、健康成人HIF-1α表达很弱甚至不表达,而SDF-1α有一定的表达。缺血性脑卒中患者发病1、14天较对照组HIF-1α的表达差异有统计学意义(P<0.05),发病7天、14天较对照组SDF-1α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。发病30天较对照组HIF-1α、SDF-1α的表达差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、7天HIF-1α持续高表达,7、14天SDF-1α持续高表达,SDF-1α表达的时相滞后HIF-1α,HIF-1α和SDF-1α表达的时相一致,具有正相关性。
结论:生理情况下HIF-1α表达较弱或无表达、SDF-1α有一定程度的表达。缺氧可诱导HIF-1α、SDF-1α的表达增高,SDF-1α的表达时相滞后HIF-1α,两者存在明显正相关。