MLO-Y4中Cbfal诱导表达新基因的分离

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骨骼的形成和发育是与许多因素相关的复杂过程,转录因子是影响骨生长非常重要的因素。目前已知与成骨细胞分化相关的转录因子有两个:Cbfa1(Core Binding Factor 1)和Osx(Osterix)。Cbfa1于1997年被证明是控制骨形成的关键因子,适量表达可以促进成骨细胞的早期分化;而过量表达会抑制成骨细胞的成熟。2002年Kazuhisa等用抑制性消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)的方法分离出转录因子Osx。Cbfa1和Osx基因分别作用于成骨细胞分化的不同时期:Cbfa1调控间充质细胞向前成骨细胞分化,Osx在前成骨细胞向成骨细胞分化过程中起作用。 本论文直接目的是分离可被Cbfa1诱导的新基因,长远目标在于找到与骨骼细胞分化相关转录因子。本文以具有早期骨细胞特征MLO-Y4(Murine Long Bone Osteocyte-Y4)细胞为研究对象,将Cbfa1基因转染到细胞内后,用抑制性消减杂交(SSH)方法进行新基因分离,成功构建了Cbfa1诱导下表达基因片段文库。从文库中随机选出的83个阳性克隆中,含有Cbfa1基因片段克隆24个,含有其它已知基因片段克隆19个,含有未知基因片段克隆40个,占克隆总数的67.8%。实验用Virtual Northern blot方法证明了其中一个没有同源序列的未知基因是Cbfa1诱导下表达的新基因。因为,在Cbfa1诱导的已知基因中有Osx存在,所以,MLO一Y4中Cbfal诱导表达新基因的分离实验进一步以RT一PCR法证实在MLO一Y4细胞中Cbfal可以诱导osx表达。本实验同时用RT一PCR法在另两种成骨细胞MC3T3一El、UZOS中也检测到了Cbfal诱导osx的表达。
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