第一部分:激光捕获显微切割技术联合RNA体外线性扩增技术获得均质性实验样品 目的:(1)改进文献报道的激光捕获显微切割(LCM)方法、步骤,确定一套适合于捕获膀胱正常移行细胞及膀胱移行细胞癌细胞的技术路线;(2)获得均质性膀胱正常移行细胞及膀胱移行细胞癌细胞Total RNA及高质量、充足的aRNA,以备进一步用于膀胱癌相关基因研究;(3)确定LCM过程中激光激发次数(shootings)与获得膀胱移行细胞RNA量之间的对应关系。方法:(1)设置对照实验Ⅰ确定改进的LCM技术路线的可靠性;设置对照实验Ⅱ,检测shootings与RNA量之间的对应关系;应用激光捕获显微切割技术(LCM),获得均一的研究目的细胞;(2)应用RNeasy Mini Kit、the RNase-free Dnase Set、Rneasy MinElute Cleanup Kit,提取、纯化及浓缩微量Total RNA;(3)应用RNA体外线性扩增技术获得高质量、充足的aRNA;(4)应用RT-PCR技术鉴定β-actin基因在扩增前、后RNA中表达水平。结果:(1)对照实验Ⅰ显示采用改进的LCM技术获得的RNA完整性好;(2)对照实验Ⅱ显示捕获膀胱移行细胞4万shootings可获得RNA 484ng;(3)获得均质性膀胱移行细胞及癌细胞Total RNA(ng级);(4)获得片段大小为0.5～2.5kb的aRNA(ug级);(5)β-actin基因在扩增前、后RNA中恒定表达。结论:LCM结合RNA线性扩增技术获取均一的、完整性好的、足量的目的细胞RNA,可用于进一步膀胱癌相关基因研究。 第二部分:膀胱移行细胞癌与膀胱移行细胞基因差异表达研究 目的:(1)优化DDRT-PCR反应条件,确定适合微量RNA的最佳条件;(2)