【摘 要】
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目的:研究SIK2对大鼠脑缺血-再灌注过程中能量代谢的调控及线粒体自噬的影响。方法:选用成年Sprague-Dawley雄性大鼠（240-260g）,参照改良Zea-Longa线栓法建立大鼠短暂性右侧中动脉栓塞模型（MCAO）,2h后拔出线栓,再灌24h。在大鼠进行中动脉栓塞手术前8天,予以右侧脑室注射7μl的腺病毒构建大鼠脑组织SIK2过表达模型。实验分为假手术组（Sham）、缺血组（Ische
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目的:研究SIK2对大鼠脑缺血-再灌注过程中能量代谢的调控及线粒体自噬的影响。方法:选用成年Sprague-Dawley雄性大鼠（240-260g）,参照改良Zea-Longa线栓法建立大鼠短暂性右侧中动脉栓塞模型（MCAO）,2h后拔出线栓,再灌24h。在大鼠进行中动脉栓塞手术前8天,予以右侧脑室注射7μl的腺病毒构建大鼠脑组织SIK2过表达模型。实验分为假手术组（Sham）、缺血组（Ischemia）、再灌组（Reperfusion/C+R）、腺病毒空载组（Ad-GFP+R）及SIK2过表达组（Ad-h SIK2+R）,（n=5）)。苏木精-伊红染色（HE）观察大鼠脑组织水肿、神经细胞损伤等病理学改变;TTC染色观察大鼠脑组织梗死情况;ELISA检测各组大鼠脑组织中ATP的含量;RT-PCR和Western-blotting分别检测各组大鼠脑组织中SIK2、mTORC1、p-mTORC1、HIF-1α、PINK1及Parkin的m RNA和蛋白表达量;利用透射电镜观察线粒体的形态学变化及自噬的发生。结果:1、脑组织形态学改变:与假手术组和缺血组比,再灌组神经细胞损伤较重,梗死面积较大,差异有统计学意义（p<0.05）;与再灌组和空载组比,过表达组神经元损伤减轻,梗死面积变小（p<0.05）且再灌组和空载组差异无统计学意义（p>0.05）;2、脑组织中ATP含量变化:缺血组和再灌组ATP含量比假手术组降低（p<0.05）;过表达组ATP含量比再灌组和空载组均升高（p<0.05）;3、脑组织中能量相关标志物的表达水平改变:SIK2在再灌组比假手术组和缺血组降低（p<0.05）,mTORC1在缺血组和再灌组比假手术组降低（p<0.05）,HIF-1α在缺血组升高,再灌组降低（p<0.05）,PINK1在缺血组和再灌组比假手术组降低（p<0.05）而再灌组比缺血组降低明显（p<0.05）,Parkin在再灌组比假手术组和缺血组均降低（p<0.05）;mTORC1、PINK1、Parkin及HIF-1α在过表达组比再灌组和空载组均升高（p<0.05）,且再灌组和空载组比差异无统计学意义（p>0.05）;4、线粒体结构的变化及线粒体自噬的发生:透射电镜显示假手术组线粒体结构及形态正常,线粒体嵴清晰可见;缺血组线粒体轻度肿胀,亦可见线粒体嵴;再灌组与空载组线粒体高度肿胀呈空泡状,线粒体嵴溶解;过表达组线粒体轻度肿胀,可见线粒体嵴且自噬小体可见。结论:SIK2在大鼠脑缺血-再灌注过程中可通过SIK2-mTOR途径促进能量代谢的发生,并且参与调控线粒体自噬从而减轻脑组织损伤。
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