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背景:随着中国老龄化程度的加剧,骨质疏松症(Osteoporosis,OP)的发病率逐年上升,而对于OP的治疗仍以药物治疗为主,因此急需寻找新的安全有效的治疗方式。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一种具有向多种细胞分化潜能的干细胞。同时,大量研究表明,促进BMSCs分化成为成骨细胞在OP的防治中具有重要作用。弱激光是一种低能量激光,具有非侵入性等众多优势。使用弱激光照射(Low Level laser Irradiation,LLLI)能够促进BMSCs成骨分化来发挥抗骨质疏松的作用,但对于具体的效应机制仍未可知。环状RNA(circluarRNA,circRNA)是一种存在于生物体中的特殊非编码RNAs,具有充当微小RNAs(microRNAs,miRNAs)海绵功能,以及高稳定性、多样性等特点。在肿瘤、精神性疾病、骨骼系统疾病中发挥重要的作用。另外,circRNA也参与了干细胞的分化过程,结合本课题的前期研究,circRNA是否在LLLI对BMSCs的影响参与了重要作用的相关研究仍未见报道。目的:探究LLLI通过circRNA_0001052/miR-124-3p/Wnt/β-catenin信号通路对BMSCs成骨分化的影响。方法:选取5周大小健康的SPF级雄性C57BL/6J小鼠,通过分离小鼠的股骨和胫骨,冲洗出骨髓中的BMSCs,并采用细胞贴壁法培养所需实验的细胞。通过对各代细胞的培养并观察细胞的形态特征及生长状况,拍照记录。对第三代细胞采用流式细胞术对细胞表面抗原CD44、CD45、Sca-1进行鉴定。将生长良好的第三代BMSCs分为对照组和实验组,实验组则给予LLLI处理。使用CCK-8试剂盒检测LLLI对BMSCs的活性;Trizol法提取总RNA,进行实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)分析circRNA_0001052、Wnt4、β-catenin和miR-124-3p mRNA表达变化;桑格测序验证circRNA_0001052的反向剪接及生物信息法预测circRNA_0001052与相关miRNA的结合位点。利用双荧光素酶基因检测circRNA_0001052与miR-124-3p的靶标关系,并通过调节circRNA_0001052和miR-124-3p,运用RT-qPCR、Western blot分析,观察其对Wnt4和β-catenin的影响。结果:(1)流式细胞仪结果显示第3代小鼠BMSCs细胞均一性较好,携带阳性抗原CD44或Sca-1的细胞分别占总数的92.3%和93.3%,阴性抗原CD45占总数的3.3%,这说明通过贴壁培养获得了BMSCs。(2)CCK-8结果表明在3.84J/cm~2的适宜能量照射下,LLLI增加BMSCs的活性。(3)通过RT-qPCR技术检测发现LLLI降低了circRNA_0001052的表达。(4)生物信息法预测circRNA_0001052与miR-124-3p存在结合位点,双荧光素酶实验显示circRNA_0001052对miR-124-3p具有海绵吸附作用。(5)RT-qPCR和Western blot检测结果表明LLLI处理后,miR-124-3p、Wnt4、β-catenin的mRNA水平升高,升高的miR-124-3p激活了Wnt4/β-catenin信号通路。结论:(1)全骨髓贴壁培养法可以获得高纯度的BMSCs;(2)LLLI处理能够增加BMSCs的活性;(3)circRNA_0001052是miR-124-3p的内源海绵;(4)LLLI通过circRNA_0001052/miR-124-3p/Wnt4/β-catenin途径调节BMSCs的成骨分化。