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目的:本课题通过体内和体外试验研究卵巢高反应对种植窗期的子宫内膜上皮细胞和间质细胞上趋化因子及受体SDF-1/CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响,以进一步揭示高甾体激素对趋化因子的调节作用和对胚胎种植的潜在影响。
方法:
1. 选择不同卵巢反应程度者的种植窗期子宫内膜,通过免疫组织化学、RT-PCR、荧光实时定量PCR 及Western-Blot 方法比较不同甾体激素水平对人种植窗期子宫内膜SDF-1/CXCR4表达的差异。
2. 分离、纯化和原代培养人子宫内膜上皮细胞、间质细胞,加入不同浓度的雌激素及雌激素受体拮抗剂后,分别进行荧光实时定量PCR 及Western-Blot检测,研究雌激素对子宫内膜细胞中SDF-1/CXCR4表达的影响。
结果:
1. 体内实验发现人种植窗期子宫内膜表达趋化因子SDF-1 及其受体CXCR4,其中CXCR4 在内膜组织上高表达,SDF-1 在内膜腺体、腔上皮细胞中表达,而在间质中不表达。本实验进一步观察了不同卵巢反应程度者子宫内膜上SDF-1/CXCR4的表达,实验结果提示不同甾体激素水平在mRNA和蛋白水平对子宫内膜SDF-1/CXCR4的表达均无显著差异。
2. 体外实验发现:对照组和处理组(添加不同浓度雌二醇及添加雌激素受体拮抗剂)上皮和间质细胞全部表达SDF-1和CXCR4。其中SDF-1基因在子宫内膜上皮和间质细胞中表达均较CXCR4弱。实验结果均提示:无论是子宫内膜上皮还是间质细胞,SDF-1/CXCR4 在mRNA和蛋白水平,对照组与各个处理组间差异均无显著性。
结论:种植窗期子宫内膜表达的SDF-1与CD56bright CD16-NK细胞膜上高表达的CXCR4相互作用,使外周CD56bright CD16-NK细胞循SDF-1的浓度梯度被招募至子宫内膜局部,从而有助于形成种植窗期子宫内膜独特的免疫微环境并有利于胚胎种植。CXCR4在内膜组织上高表达,提示它对于母胎免疫耐受,维持子宫内膜接受性方面可能起着重要的作用。雌激素不影响种植窗期子宫内膜上SDF-1/ CXCR4 mRNA和蛋白的表达,故推测在种植窗期雌激素调控CD56bright CD16-NK细胞的募集可能不通过SDF-1/CXCR4这对趋化因子,而可能通过其它细胞因子来参与调节。