噻虫啉模拟表位的筛选及噬菌体酶联免疫分析方法研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wavepku
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
合成了噻虫啉半抗原,采用混合酸酐法将噻虫啉半抗原与卵清蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原;与牛血清蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原用于免疫BALB/c小鼠。将骨髓瘤细胞SP2/0与免疫过的小鼠脾脏细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞。通过系列筛选和亚克隆,最后得到能稳定分泌抗噻虫啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3A5)。将3A5杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化腹水得到抗体。基于单克隆抗体建立了噻虫啉间接竞争ELISA方法,并对抗原抗体浓度和工作溶液(甲醇含量、离子强度、pH值)进行优化。在最佳优化的条件下(5%甲醇PBS溶液、Na+ 0.14 M、pH 7.4),间接竞争ELISA的IC50值和最低检测限(IC10值)分别为26.3μg/L和1.4μg/L。与噻虫啉结构类似物的交叉反应率都小于0.1%,可以认为没有交叉反应。利用Ph.D.Peptide Display Cloning System构建了随机展示线性八肽库。将33-bp的简并序列连接到M1 3KE载体上,把连接产物电击转化到大肠杆菌感受态细胞制备噬菌体展示线形八肽库,TU为8.7×108 pfu/μg,滴度为1.6×1012pfu/mL。利用生物淘选的方法,从环形8肽噬菌体库及线形8肽噬菌体库中筛选出6种噬菌体展示多肽,并建立了噻虫啉残留噬菌体酶联免疫分析方法。在最优的条件下(5%甲醇PBS溶液、Na+强度0.14M、pH8.5),噬菌体酶联免疫分析方法的IC50值为8.3ug/L,最低检测限IC10值为0.7μg/L,检测范围(IC20-IC80)为1.2-61.1 ug/L。与传统的ELISA法相比,灵敏度提高3倍以上,与其它结构相似的交叉反应率小于0.01%,可以认为没有交叉反应。在土壤、梨、番茄、甘蓝样品中的添加回收率在80.33~116.3%之间,RSD在1.98-9.76%之间,符合农药残留检测的标准。噬菌体ELIS A的检测结果与HPLC的检测结果高度一致,两种检测方法的相关性方程为Y=1.0267x+0.0015,R2=0.9894。研究结果表明从噬菌体展示库中淘选噬菌体展示多肽可以建立敏感的免疫分析的方法,同时建立的分析方法是一种潜在的、有用的检测环境和农产品中噻虫啉的工具。
其他文献
应用排序不等式巧解一串竞赛题毛晓峰(兰州铁路一中730000)排序不等式:设两组实数a1,a2,…,an和b1,b2,…,bn满足a1≤a2≤…≤an,b1≤b2≤…≤bn则a1b1+a2b2+…+anbn(顺序乘积和)≥a1bi1+a2bi2+…+...
提高数学课堂教学效率和学生的学习效率,要从提高学生的数学能力和数学思维,提高他们的思维创新性和思维的想象力来实现.教师在教学中要培养学生的数学思想,让他们具备熟练应
众所周知,企业文化对企业绩效有着重要影响,本文针对这一问题分析了企业文化和企业绩效的定义,并对企业文化对企业绩效的影响进行了实证分析,从而得出重要结论,期望能对此方
通过活动加强生生间,师生间的互动,激发学生参与活动,投身学习的热情.活动教学、活动课堂更能彰显学生的主体地位,挖掘学生的潜能,为教师的展示提供更多意外的生成和惊喜.
学习的社会属性越来越成为一种共识,随着计算机技术的介入,计算机支持的协作学习已成为当前教育技术领域中的热点问题。协作学习平台是协作学习活动开展的重要支撑,本文利用B
<正>三角函数是描述周期变化现象的重要函数模型,是学习高等数学、物理和应用技术学科的基础,又是解决生产实际问题的工具.因此,对三角函数的图象与性质的考查总是每年高考的
三角函数的图象与性质(包括三角函数的定义域、值域、奇偶性、单调性和周期性)是三角函数的核心内容,它既是高考的热点,也是解决实际问题的工具.高考在考查三角变换的基础上,
在人教A版选修4-4《坐标系与参数方程》中,只介绍了直线、圆的极坐标方程,没有介绍圆锥曲线的极坐标方程.实际上,对于圆锥曲线的焦半径或者焦点弦问题,引入极坐标,会大大简化
气候变化给国家和人类的生存和发展带来了前所未有的挑战,对人权产生了许多负面影响,也引发了气候移民问题。但是,许多国家并不保护那些因恐惧气候变化的危险而申请移民的人
主持人手势语的运用,对信息传递、主持人形象塑造、人际互动沟通等层面均有重要影响。本文借鉴语言学概念和成果,明确主持人手势语的内涵和类型,并且阐述研究主持人手势语的