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实验目的通过观察单用LY294002，顺铂以及LY294002与顺铂联合应用对细胞的抑制增殖作用，探讨PI3K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113/CDDP的可行性。材料与方法1.间歇的给药，逐渐的增加剂量，连续在体外诱导培养人舌磷癌顺铂耐药细胞；加药培养2天，培养基中含0.3μg/mL的CDDP，2天后更换成正常培养液。待细胞正常传代后重复加药一次。在进入下一个浓度(以起始浓度的1倍间歇性加药)前培养一周，诱导耐药细胞产生。2.实验分为耐药细胞TCA8113/CDDP组和正常癌细胞TCA8113组。分别以5μmol/l，10μ mol/l，20μ mol/l，40μ mol/l浓度LY294002分别作用于TCA8113和TCA8113/CDDP细胞24h，48h；联合抑制率以各细胞顺铂IC50浓度联合LY294002作用于两组细胞24h。MTT法对比药物对两种细胞抑制率的影响。3.实验分为空白组，对照组，实验组。空白组不加药物，对照组加顺铂IC50浓度，实验组分别加浓度为5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l，40μmol/l PI3K抑制剂LY294002和顺铂，浓度为其相应的IC50值。药物作用时间为24h，24h后提取总蛋白质，采用蛋白免疫印迹的方法分析LY294002作用前后通路相关蛋白p-Akt、Akt、PI3K的表达。结果1.建立TCA8113/CDDP耐药细胞，耐药倍数为7.7。2. MTT显示作用时间越长，作用浓度的越大， LY294002对TCA8113及TCA8113/CDDP细胞的抑制作用越强。LY294002与顺铂联合应用对两种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好。3. PI3K、Akt、p-AKT蛋白表达明显降低。其中TCA8113/CDDP细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多(p<0.05)。结论1. LY294002能够抑制TCA8113及TCA8113/CDDP细胞增殖,具有浓度和时间依赖性。2. LY294002能增加耐药口腔鳞癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性。