前列腺素类可以抑制睫状肌细胞内TIGR蛋白的表达,这可能是其降压作用的一个中间环节.而药物作用于小梁网降压的具体机制还有待进一步深入研究.该试验拟用糖皮质激素地塞米松,诱导TIGR蛋白在牛眼小梁网组织的表达,并试验各种促进小梁网通路房水外流的降眼压药物,主要是前列腺素类药物对该蛋白的作用,为进一步阐述TIGR基因及其编码产物的功能补充证据,同时也从另一方面完善这类抗青光眼药物的作用机制.第一部分:合成TIGR抗原性多肽,制备并鉴定TIGR多克隆抗体 根据文献报道方法,合成具有较高抗原性、特异性的多肽DKSVLEEEKKRLRQ.用其免疫新西兰白兔2只,采用多点皮下注射的方法,采集血清来制备多克隆抗体.用Elisa试验鉴定制备的抗体.第二部分:培养牛眼小梁细胞并传代 按古亚娟等方法,用DMEM-F12培养基培养原代牛眼小梁细胞并传代,第3代至第5代细胞用于试验.第三部分:地塞米松诱导TIGR的表达 将地塞米松(dexamethasone)溶于二甲基亚飒(DMSO)溶液配成储存液,按不同浓度均匀混入培养基内与小梁细胞共孵2周,又以5μM地塞米松作用不同时间诱导TIGR蛋白的表达.第四部分:前列腺素类等药物对TIGR蛋白表达的影响 取3-5代成熟小梁细胞,分别加入前列腺素类(PGE、PGF2 α、xalatan、lμmigan)和nifedipine等预孵2个小时,再加入5μM地塞米松(dexamethasone)作用2周时间,用制备的TIGR多克隆抗体,通过细胞免疫荧光组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法及Western blotting蛋白免疫印迹方法等检测TIGR转录水平及表达水平的变化.结论:1)地塞米松可以在体外诱导TIGR蛋白在牛眼小梁细胞内的表达;TIGR蛋白的表达量具有地塞米松剂量和时间的依赖性;2)前列腺素类包括PGE、PGF2 α、lumigan、xalatan和钙通道阻滞剂nifedipine对TIGR蛋白在体外牛眼小梁细胞内的表达具有抑制作用;3)地塞米松在体外诱导TIGR蛋白的表达同时伴有信号通路蛋白c-Jun的表达增加,PGF2 α又可以抑制地塞米松的这种作用,但不是通过JNK通路实现的.