目前，几乎所有的植物遗传转化都要使用选择标记基因，诸如抗生素或除草剂抗性基因等来筛选转化子，虽然仍无直接研究结果表明选择标记基因影响人类健康或环境安全，但近年来人们对转基因产品安全性的担心却与日俱增。为了消除转基因食品的安全性顾虑，无选择标记转基因植物应运而生。结球甘蓝在我国蔬菜周年供应中占有重要地位。菜青虫、小菜蛾等害虫是甘蓝生产的主要障碍之一，常造成甘监的大幅度减产或品质下降。但迄今为止，通过常规育种方法选育抗虫的蔬菜新品种尚未取得重大进展，鉴于基因工程在农作物品种改良方面取得的巨大成功，通过转基因途径向甘蓝等蔬菜导入抗虫基因成为大家关注的焦点。大豆kunitz蛋白酶抑制剂(SKTI)是一种主要存在于大豆种子中的蛋白酶抑制剂。通常认为这种蛋白酶抑制剂的生理功能是作为储藏蛋白，调节内源蛋白酶的活性，以及保护种子不受昆虫和病原菌的侵害等，是一种天然的抗虫物质。更为重要的是，现已证实蛋白酶抑制剂转入食用作物中，对人畜没有副作用。因此，将该蛋白酶抑制剂作为抗虫目的基因并结合无选择标记转基因技术获得的抗虫转基因甘蓝将有利于消费者的接受。 本研究采用目前在植物抗虫基因工程中广泛使用的大豆胰蛋白酶抑制剂(SKTI)基因为抗虫目标基因，除草剂基因Bar基因作为筛选标记基因，为了便于Bar基因的剔除，在构建连锁表达载体的同时，将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点间。将含Cre基因的植物表达载体plus-cre，对得到的抗虫植株进行二次转化，将重组酶基因Cre引入；或单独转化烟草、甘蓝，在开花时通过有性杂交的手段将重组酶基因引入而实现Bar基因剔除的目的。存在于植株中的Cre基因及相应的筛选标记可通过花期自交分离的方法去除，最终获得仅含抗虫目的基因的转基因植株。主要研究结果包括以下几个方面： 1．甘蓝高频再生—转化体系的建立 甘蓝(铁头金刚)种子在无菌操作台内播种于1/2MS固体培养基中发芽，以发芽6～7d(依具体发芽情况而定)的下胚轴为外植体，MS为基本培养基，附加不同浓度的NAA(0.1～0.2mg/L)与BA(1.0～3.0mg/L)的激素组合，筛选芽分化的最佳培养基。结果表明：