木霉菌是自然界广泛存在的一类生防菌,其生防机制多种多样,长枝木霉菌株T05是在东北地区采集的菌种,对低温有一定的耐受性,因此,研究其生防机制和次生代谢产物对北方寒冷地区植物病害的防治具有重大意义。本文从长枝木霉菌株T05对病原菌的拮抗机制、发酵液抑菌力的优化、发酵液稳定性的测定、次生代谢产物的分离纯化和结构鉴定等方面进行了一系列的研究,研究结果如下:(1)T05与5种病原真菌单独培养时,T05的生长速度最快,有较强的空间和营养占领能力。T05产生的具挥发性物质对辣椒灰葡萄孢菌和油茶炭疽病菌有一定的抑制作用,并使病原菌菌丝变得发暗、发黄、干枯。镜检交界处菌丝发现,T05菌丝以缠绕、覆盖等方式与病原菌菌落竞争空间和营养,并且部分菌丝还侵入到病原菌菌丝内吸取营养。T05发酵液乙酸乙酯粗提取物对5种病原菌均表现出较强的抑菌效果。(2)抑菌力优化结果表明,培养方式不同,发酵液提取物对病原菌的抑菌效果不同,通过筛选,获得最高抑菌率的最佳发酵组合为:摇床培养6d,温度28℃,初始pH值6.0,500mL的三角瓶装液量250mL的条件下接菌量为0.5mL。(3)T05发酵液稳定性测定结果表明,强酸影响T05发酵液的抑菌活性,强碱对发酵液的抑菌活性几乎无影响。温度(100℃以内)对发酵液的抑菌活性影响不大,但高温、高压对发酵液的抑菌活性有一定的影响。紫外线对发酵液的抑菌活性影响不大,短时间抑菌率无变化。光照10d内,发酵液的抑菌率比较稳定,10d后,抑菌率开始明显下降。随着氧化剂和还原剂浓度的增加,发酵液的抑菌率逐渐下降。Na+、K+、Fe2+、Fe3+、Mg2+、Cu2+对发酵液的抑菌活性影响较小,Zn2+对发酵液抑菌活性有一定影响。发酵液在常温环境下活性稳定,可以长时间存贮而不失活。(4)采用活性追踪法,运用薄层层析、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、紫外光谱、液质联用、核磁共振等方法对T05菌株发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物进行了分离纯化与结构鉴定,通过紫外光谱、LC-MS及NMR分析得到:该化合物为长枝联喹啉内酯(bislongiquinolide),其分子式为C28H32O8。