论文部分内容阅读
目的:探讨阿司匹林与miRNA-15b对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长（如增殖、凋亡、转移等）的影响。 方法:构建过表达 miRNA-15b质粒表达载体,采用体外细胞培养法培养MDA-MB-231,建立人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231裸鼠皮下移植瘤模型，观察miRNA-15b与阿司匹林单独治疗及联合治疗对移植瘤生长的影响，定期观察测量肿瘤体积变化，记录最终肿瘤体积、质量及计算抑癌率，用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组乳腺癌组织细胞凋亡率，用荧光定量PCR法检测各组乳腺癌组织miRNA-15b和EZH2 mRNA表达情况，用免疫组化方法检测各组乳腺癌组织EZH2、PCNA和MVD表达情况。 结果:1.成功构建重组的质粒表达载体pcDNA6.2-miRNA-15。 2.所有裸鼠均在接种后5~8d内成瘤，成瘤率100％，肿瘤随时间的延长而增大,肿瘤生长曲线显示：对照组相比，各治疗组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，尤其以联合治疗组抑制肿瘤生长的作用最为明显。 3.最终体积与瘤重显示：空白对照组与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；各治疗组与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组与阿司匹林组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；联合治疗组与 miRNA-15b组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。各组的抑瘤率分别为：阿司匹林组43.47%、miRNA-15b组60.38%、联合治疗组72.13%。 4.各组移植瘤细胞凋亡率的结果显示：空白对照组与阴性对照组移植瘤的早期凋亡率比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；各治疗组与对照组移植瘤的早期凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组与阿司匹林组移植瘤的早期凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.05)；联合治疗组与miRNA-15b组移植瘤的早期凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组与阴性对照组、阿司匹林组和联合治疗组移植瘤的晚期凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组和联合治疗组与其它处理组移植瘤的总凋亡率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。 5.荧光定量PCR结果显示：各处理组之间移植瘤EZH2 mRNA的表达比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；空白对照组、阴性对照组和阿司匹林组各组之间移植瘤miRNA-15b的表达比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；miRNA-15b组、联合治疗组与其它处理组之间移植瘤 miRNA-15b的表达比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组与联合治疗组之间移植瘤miRNA-15b的表达比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。 6.免疫组化结果：（1）EZH2结果：空白对照组、阴性对照组和阿司匹林组各组之间比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；miRNA-15b组、联合治疗组与其它处理组之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA-15b组与联合治疗组之间比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。（2）PCNA和MVD结果：空白对照组与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；各治疗组与对照组移植瘤比较，差异有统计学意义(P<0.05)； miRNA-15b组与阿司匹林组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；联合治疗组与miRNA-15b组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：1、在体内，重组真核表达质粒pcDNA6.2-miRNA-15b能降低乳腺癌裸鼠移植瘤瘤体EZH2的蛋白表达水平。 2、miRNA-15b介导的抑制 EZH2基因翻译在一定程度上可降低乳腺癌裸鼠移植瘤瘤体的体积和质量，促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤增殖与转移。 3、联合应用阿司匹林时，可增强抑瘤作用，但具体作用机制还有待验证。 4、基因治疗作为一种肿瘤的治疗手段，具有良好的应用前景，EZH2有望成为乳腺癌治疗的新靶点。