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非编码小分子RNA(snmRNA)是一类功能广泛的RNA分子,它们以结构、催化或调控分子的方式参与细胞中的各种生命活动.大规模筛选和鉴定snmRNA、研究其结构和功能,对揭示细胞中的各种生命现象具有重要作用.本文采用实验RNA组学方法构建了粟酒裂殖酵母核小分子RNA的cDNA文库,通过文库筛选和序列测定,共获得了43种新的snmRNA,其中20种snmRNA具有box H/ACA snoRNA的序列和结构元件,为新的box H/ACAsnoRNA,另外23种snmRNA无己知RNA类型的保守序列和结构元件.Northern杂交显示,20种box H/ACA snoRNA均能产生明显的杂交信号,表明他们是能够在细胞中稳定表达的snoRNA分子;23种无保守序列元件和结构元件的snmRNA分子中有21种能产生明显的杂交信号,2种来自蛋白质基因反义链的分子无明显杂交信号,可能是由于它们的表达水平太低造成.将粟酒裂殖酵母20种box H/ACA snoRNA与目前已经报道的酿酒酵母boxH/ACA snoRNA相比较,发现20种粟酒裂殖酵母snoRNA中有7种在酿酒酵母中有功能同源分子,1种有部分功能同源分子.采用BLAST程序对粟酒裂殖酵母基因组进行搜索,发现本文鉴定的20种box H/ACA snoRNA均由单拷贝基因编码,它们分别位于粟酒裂殖酵母染色体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ上蛋白质基因的间隔区,其间隔区的大小为600至3000 nt.除snR90外,所有box H/ACA snoRNA基因的5端上游和3端下游均无其它snoRNA基因.在这些snoRNA基因5端上游均发现了典型的TATA box元件,表明它们都是独立转录的基因.snR90基因位于一个非编码RNA基因的外显子中,该非编码RNA基因的内含子中还存在一个box C/D类snoRNA(snR80)基因.采用CMC-引物延伸法在粟酒裂殖酵母rRNA上共检测到30个假尿嘧啶位点,其中24个位点为进化中保守的假尿嘧啶位点,6个位点为粟酒裂殖酵母特有的假尿嘧啶位点.通过snoRNA基因缺失株的生长实验,发现9个snoRNA基因缺失菌株均能够于23℃、30℃和37℃条件下在不含G418的YPD培养基上生长,表明这些snoRNA基因不是粟酒裂殖酵母生存必需的基因.本研究所取得的成果为全面了解粟酒裂殖酵母细胞中snmRNA的种类、snmRNA的结构与功能的关系,进而揭示snmRNA在细胞生命活动中的作用奠定了基础.