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目的:探讨磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)在BRAFV600E突变型恶性黑色素瘤(Malignant melanoma,MM)细胞对Vemurafenib(Zelboraf?)的敏感性中的作用及其机制。方法:1)使用基因沉默技术(Small interfering RNA,siRNA),处理5株黑色素瘤细胞株(A375m,A375mR,1205LU,UACC903,C8161-C9)72小时,将每株分为PGK1基因沉默组(siPGK1组)和非沉默组(si-Non-Target,si NT组),siPGK1组沉默PGK1基因,siNT组不沉默PGK1基因。2)使用MTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,approx.98%TLC)实验方法分别检测5株黑色素瘤细胞株siPGK1组、siNT组细胞的存活能力,各组分别给以不同浓度的BRAF突变抑制剂vemurafenib(0,0.01,0.1,1,10μM)处理后测定细胞的存活能力,以及siPGK1组、siNT组,联合vemurafenib处理后测定细胞的存活能力。3)使用Western Blot实验方法检测5株黑色素瘤细胞株PGK1基因的表达量,PGK1基因沉默效果,以及沉默PGK1基因后再给以vemurafenib(0,2μM)处理24小时后,PGK1的表达量变化和PARP蛋白表达量以及活性变化。4)使用克隆集落(Colongenic Assay)方法检测培养14天后5株黑色素瘤细胞株siPGK1组和siNT组细胞形成集落个数、大小、增殖能力。以及联合给以vemurafenib(A375m:0,0.25,0.5,1μM;A375mR,1205LU,UACC903,C8161-C9:0,2.5,5,10μM)处理后各组细胞形成集落个数、大小、增殖能力。5)使用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测siPGK1组和siNT组联合给以vemurafenib(A375m:0,0.25,0.5μM;A375mR,1205LU,UACC903,C8161-C9:0,2.5,5μM)处理24小时后5株黑色素瘤细胞株的凋亡情况,以及细胞早期凋亡和晚期凋亡的变化情况。结果:1)Western Blot结果显示PGK1在4株BRAF突变型(A375m,A375mR,1205LU,UACC903)黑色素瘤细胞株中呈高表达,在野生型(C8161-C9)黑色素瘤细胞株中呈低表达。其中A375m PGK1的表达量约为C8161-C9的2.26倍(P<0.01),A375mR PGK1的表达量约为C8161-C9的1.69倍(P<0.05),1205LU PGK1的表达量约为C8161-C9的1.20倍,UACC903 PGK1的表达量约为C8161-C9的2.04倍(P<0.01)。2)沉默PGK1基因后再给以BRAF突变型选择性抑制剂vemurafenib,黑色素瘤细胞株的存活率明显下降,并表现出一定的剂量依赖性。MTT Assay结果显示:对野生型C8161-C9的抑制作用不明显,A375mR在较低剂量浓度有一定的疗效,但是在较大剂量浓度(>1μM)时便出现耐药性。但是对另外的3株BRAF突变型黑色素瘤细胞的作用效果明显,对A375m的抑制作用效果最为明显,10μM的vemurafenib对A375m的抑制率达到了78%(P<0.05)。3)siPGK1增加黑色素瘤细胞对vemurafenib的敏感性,这一特征与激活细胞凋亡信号通路有关。以A375mR、UACC903的凋亡信号通路活化效果最为明显,而C8161-C9的活化效果最差。4)1205LU、UACC903、C8161-C9细胞以早期凋亡为主,A375m、A375mR则以晚期凋亡为主。结论:沉默PGK1可能通过激活细胞凋亡通路增加黑色素瘤细胞对vemurafenib的敏感性,从而抑制黑色素瘤细胞的存活和增殖能力。