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从血浆中分离纯化各种药用蛋白质仍然是生物技术的重要产业,而高纯度微量血浆蛋白制品的开发是血液制品发展的一个不容忽视的趋势,层析法以其特有的选择性和灵活性在血浆蛋白的分离纯化中起着举足轻重的作用,它已成为获得某些较高纯度微量血浆蛋白不可或缺的方法.本文首先研究了血浆中抗凝血酶-Ⅲi(Antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)的分离纯化,通过正交实验优化了常温下肝素-琼脂糖亲和层析过程,并将其应用于低温4℃条件,显著提高了从人血浆中提取AT-Ⅲ的分离效果,为批量制备临床治疗用AT-Ⅲ浓缩剂提供依据.另外,采用国产的发色底物测定AT-Ⅲ的生物活性,探索了自制凝胶等电聚焦电泳检测纯化的AT-Ⅲ产品的方法,操作简便、价格低廉和准确性高.接下来重点对低温乙醇废弃组分Ⅳ中的微量蛋白的利用进行了研究.用聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)沉淀处理组分Ⅳ悬液,在优化的亲和层析条件下,从组分Ⅳ中成功提纯了AT-Ⅲ,比较了二步PEG沉淀和一步PEG沉淀预处理对亲和层析过程的影响,结果表明一步PEG沉淀预处理更利于工业放大.在分离纯化AT-Ⅲ的基础上,本文进一步探索了对组分Ⅳ中其它微量蛋白的综合利用.在肝素-琼脂糖亲和层析过程中,发现由低盐淋洗得到的淋洗液的主要成分为α1-抗胰蛋白酶(Alpha-1 Antitrypsin,α1-AT),仅采用一步凝胶过滤层析将其提纯,并建立了测定其生物活性的微量发色底物法.另外,将亲和层析过程中未被吸附的组分进行疏水层析和离子交换层析,获得了人血清白蛋白(Human SerumAlbumin,HSA)和运铁蛋白.其中,疏水层析采用了Octyl Sepharose 4 FF,pH7.0,缓冲溶液中(NH<,4>)<,2>SO<,4>浓度为1.5mol/L,获取了组分Ⅳ中近乎100％的人血清白蛋白和34.2％的电泳纯运铁蛋白.离子交换层析分离该未被吸附组分时,利用电泳滴定曲线确定了层析条件:采用DEAE-Sepharose FF阴离子交换剂,缓冲液的pH为7.5,初始盐浓度为0,获取了组分Ⅳ中48.2％的电泳纯的运铁蛋白和27.3％的白蛋白.比较两者结果表明,疏水层析更利于组分Ⅳ中白蛋白的提取,离子交换层析更利于运铁蛋白的纯化.最后,对于层析法和低温乙醇法相结合实现废弃组分Ⅳ的综合利用,本文确定了工艺路线.