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烟草花叶病毒给烟叶生产造成很大损失,已成为烟草主要病害之一,本文就核桃青皮中次生物质对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)的抑制作用及其抗病毒活性机理进行初步研究,研究结果如下:(1)以不同溶剂和方法对核桃青皮进行了抗植物病毒物质的提取和活性测定,并且通过单因素试验和正交试验,以核桃青皮中抗病毒活性物质的抑制率为考察指标,对影响提取效果的各因素进行了研究。结果表明:提取物的抗病毒活性因提取溶剂和提取方法的不同而异。以体积分数95%乙醇为提取溶剂,冷浸提取物在接种浓度为10mg/mL时,对TMV的抑制率最高,为80.0%。采用冷浸提取时,各因素对核桃青皮抗病毒活性物质提取效果的影响程度从高到低依次为:乙醇浓度>液固比>提取次数>提取时间,确定了优化的提取工艺条件为:95%乙醇冷提4次,每次26h,液固比为6:1。(2)采用活性跟踪的手段进行核桃青皮中抗烟草花叶病毒活性成分的分离。按照优化的提取工艺提取样品,得核桃青皮粗提物,悬浮于蒸馏水中,依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇为溶剂萃取分离,分别得到石油醚相萃取物、乙酸乙酯相萃取物、正丁醇相萃取物和萃余水相,其中乙酸乙酯相萃取物在接种浓度为10mg/mL时对烟草花叶病毒侵染心叶烟的抑制率最高,为62.71%。该相萃取物经多次层析分离和纯化得到化合物A,化合物A在接种浓度为5mg/mL时,对TMV侵染心叶烟的抑制率达68.59%,说明化合物A是乙酸乙酯萃取物中的主要抗病毒活性成分之一。(3)化合物A与TMV混合,钝化0.5h、1h和2h后采用半叶枯斑法接种,接种浓度为5mg/mL,其抑制率分别为64.97%、69.07%和86.87%。说明化合物A对TMV具有明显的体外钝化作用。(4)防治试验表明,先涂抹化合物A接种液后接种病毒的抑制率为50.645%,而先接种病毒后涂抹化合物A接种液的抑制率为30.68%。说明化合物A具有预防TMV初侵染的作用。(5)化合物A接种普通烟,处理3d、6d、9d和12d后,测定普通烟叶片中叶绿素、丙二醛(MDA)、类黄酮、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)含量,结果发现经过化合物A供试液处理的普通烟叶片中叶绿素和类黄酮含量与发病对照相比明显增加,SOD、PPO和POD活性与发病对照相比明显提高,MDA含量与发病对照相比有所降低。说明化合物A可以通过增加叶片叶绿素和类黄酮含量、提高SOD、PPO和POD活性、降低MDA含量来增强植物的抗病性。