根据GenBank报道的猪传染性胸膜肺炎血清1型的APP apfA基因序列(NCBI登陆号:AY235718)设计并合成引物,以细菌DNA提取试剂盒提取SC-A株的总DNA为模版,用PCR方法扩增出长度为497bp的目的基因片段。将该基因克隆pMD18-T载体上,经序列测定,结果表明获得了猪传染性胸膜肺炎血清1型的SC-A株的克隆。该基因包含猪传染性胸膜肺炎血清1型的SC-A株apfA基因的全长为447个碱基的开放阅读框,编码149个氨基酸组成的功能蛋白。序列分析表明:该基因与GenBank上收录的猪传染性胸膜肺炎血清3型、4型和7型在编码的氨基酸上同源性较高,均为99.3%。将猪传染性胸膜肺炎血清1型的SC-A株apfA基因的信号肽去除后,应用PCR技术扩增出编码apfA成熟蛋白的基因,并将该成熟蛋白基因重组到原核表达载体pET-32a(+)。经酶切、PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为APP的apfA基因原核表达质粒。将重组质粒转入表达菌BL21star(DE3)细胞,阳性菌落筛选、SDS-PAGE分析以及Western blot分析表明,成功构建了APP的apfA的大肠杆菌基因工程菌株。用IPTG作为诱导剂对基因工程菌株进行诱导。结果显示,在分子量约为32kDa处有明显得蛋白质表达条带,与预期的融合APP apfA成熟蛋白大小一致。表达的蛋白质主要以不溶性包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的42.5%。重组成熟蛋白纯化复性后,免疫小白鼠,经ELISA检测发现,随免疫次数的增加抗体滴度逐渐升高:经APP SC-A株5×LD50攻毒后,结果证明该蛋白对小鼠具有一定的保护力。保护率为16.6%。