受精作用因单倍体精子和卵子融合创造出新的基因不同的二倍体有机体而对物种的延续和发展有着重要的意义。精卵融合是完成受精作用的关键，是由多分子参与的复杂过程，但目前为止还尚不明确其分子机制。研究精卵融合过程中的蛋白间相互作用，对了解并解决其中存在的问题有着不可估量的价值。IZUMO1-JUNO间相互作用是精卵融合过程中最为关键的蛋白相互作用，缺少其中任何一个都无法正常的受精。因此本实验选择JUNO蛋白作为研究对象，筛选除IZUMO1外与其相互作用的蛋白。　　1、大鼠睾丸酵母双杂交cDNA文库的构建　　本实验通过采用SMARTTM cDNA合成技术构建了大鼠睾丸的酵母双杂交文库。构建的文库库容为1.5×106 cfu，滴度为8×107 cfu/mL，重组率为78％，插入片段平均长度为0.7 kb，有较高的进行蛋白相互作用筛选的价值。　　2、pGBKT7-juno诱饵载体的构建　　以实验室克隆并保存的pMD19T-juno为模板，去掉信号肽扩增后连接到pGBKT7载体上，并对其进行鉴定、自激活检测和细胞毒性检测。通过利用载体上c-Myc抗原标签，western blot检测了pGBKT7-juno诱饵载体在酵母细胞中表达情况。使用生物信息学分析常见哺乳动物的JUNO氨基酸序列，绘制了系统发生树，分析了在进化过程中的亲缘关系。　　3、酵母双杂交筛选与JUNO相互作用蛋白　　使用构建好的大鼠睾丸酵母双杂交cDNA文库和pGBKT7-juno诱饵载体进行杂交。共筛选出5个特异性基因（mkrn1，rps21，irgc，wdr54和rnaseh2a），并分别予以分析。本实验初步筛选出了精子上与JUNO蛋白相互作用的蛋白，为进一步研究精卵融合过程提供了候选分子。