论文部分内容阅读
目的：以肾阳虚证排卵障碍性不孕患者为研究对象制作肾阳虚证的基因表达谱,筛选差异基因(P<0.05),探讨肾阳虚证的分子通路及微观分子机制,为“肾主生殖”的本质提供科学依据。方法：1、病例选择：2011年6月至2011年12月在成都中医药大学第二附属医院中医妇科门诊选取阳虚体质肾阳虚证排卵障碍性不孕患者为研究对象,确诊为典型肾阳虚证患者为病例组；选取典型平和质健康者为对照组。2、基因芯片样品制作和送样：抽取每组研究对象外周血液,编号,分离白细胞,将分离出的每一管白细胞转入1.5mlEP管,并迅速放置于液氮中保存。及时将样本从液氮中取出包装后埋入干冰,采用壁厚且质量完好的泡沫箱严格密封后通过快递公司空运送于上海伯豪生物技术有限公司(填写样品登记单)。3、基因芯片实验(芯片公司)：样品质检,全部合格后进入实验阶段,提取总RNA,纯化以完成探针的制备,运用基因芯片技术进行芯片杂交及扫描,得到病人-正常对照组表达谱数据,SAS软件统计完成差异基因表达筛选<P<0.05)。4、对差异基因进行GO功能富集度分析和KEGG通路分析。结果：1、共纳入受试者10例,剔除4例,进入分析6例：经临床评定确诊排卵障碍性不孕、阳虚体质典型肾阳虚证候病例组3例,健康典型平和质者对照组3例。2、肾阳虚证排卵障碍性不孕病例组和对照组存在差异基因表达特征图谱。获得650条差异基因表达(P<0.05)。其中上调266条,下调384条,下调基因占59.1%。获得基因名称及其基本信息的有480条。3、通过GO功能富集度分析,发现差异基因主要涉及核糖体结构组成中的核糖体蛋白泛素化、囊泡目标、建立蛋白定位,染色体分离,组织重塑、细胞前缘、运动的积极调控等多个生物学过程。4、通过KEGG通路分析,差异基因参与代谢通路、TGF-β信号通路、蛋白质泛素化、遗传信息处理通路如DNA剪接及卵母细胞减数分裂、金属离子通路、免疫通路(造血干细胞系)、内吞作用以及粘着路口等人类病证各相关的通路。以代谢通路和TGF-β信号通路最多。5、发现与生殖相关的基因：PRSS21、TP53TG3、LAST1、CCR4、SEC24A。结论：1、应用基因芯片进行基因转录组学分析是一种有良好发展前景的中医证候学研究方法。2、排卵障碍性不孕疾病与肾阳虚证病证结合,丰富了肾阳虚证候的基因库,深化了肾阳虚证微观分子生物学机制,为“肾藏精、主生殖”理论提供了客观的依据。3、肾阳虚证排卵障碍性不孕与机体的核糖体蛋白泛素化以及代谢功能的低下等有密切的关系。