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大鲵(Andrias davidianus Blanchard)俗名“娃娃鱼”,属于两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科、大鲵属,是我国现存最大的也是最珍稀的物种,并被列为国家II类重点保护野生动物。我国在上个世纪70年代对大鲵进行驯养和繁殖试验,随着大鲵人工繁殖的成功,大鲵养殖在陕西、四川、湖南、重庆、甘肃等省市快速发展,并逐步成为优势特色产业。大鲵蛙病毒(Chinese Giant Salamander Ranavirus, CGSRV)是近些年来发现的一种严重危害大鲵养殖的新型病原微生物,它感染大鲵主要表现为体表出现溃疡及大量的出血斑点,头部与四肢出现肿胀,有时形成溃疡灶,被人们称为“溃疡病或大脚病”,一旦发病,很难治愈,死亡率高,甚至高达100%,故被养殖户们称为“大鲵的癌症”。本研究建立了大鲵蛙病毒的LAMP检测方法,以期为CGSRV的早期、快速、特异性诊断及该病的预警提供技术保障。根据GenBank中登录大鲵蛙病毒MCP基因序列(登录号：HQ684746),利用LAMP引物设计网站(primerExplorerV4 (http://primerexplorer.jp/e/)设计4条特异性引物：F3:5’-GAGGGCGTACTTTTGGGC-3’; B3:5’-ATGCCACCTCCATCC CA-3’; FIP:5’-TAACGTCACCCTGTCCGCTGA-CAGAGTTGTCACCTCCG C-3’; BIP 5’-TCTGCCGTAATTGGTGGATCCG-GGCACCACCTCTACTCCTA-3’。经过对Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度和Bst DNA聚合酶浓度、反应温度、反应时间进行优化,成功建立了CGSRV的LAMP检测方法。最佳反应温度为62℃,最佳反应时间为40min,反应体系为25μL, 1μL F3(10μM), (B3(10μM), (FIP(50μM), (BIP(50μM),3.5μL dNTPs (25mM),4μL lOxThermopol buffer,8U Bst DNA聚合酶,3μLMgCl2(25mM),2μL模板DNA和7.5μL ddH2O。结果表明,该LAMP方法对CGSRV最低检测限5 copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50 copies/μL和5×103 copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR；且特异性强与锦鲤疱疹病毒、金鱼疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应。在对经普通PCR与巢氏PCR检测阳性的55例疑似患蛙病毒感染样本及8例阴性样本,采用建立的LAMP技术检测发现,其结果与普通PCR及巢氏PCR的检测结果一致。再运用以上三种方法对32例疑似样品进行检测发现,LAMP反应检测出30种,检测率高达93.75%,巢氏PCR检测出28种,检测率高达87.5%,普通PCR反应检测出22种,检测率达68.75%。试验结果表明所建立的LAMP检测大鲵蛙病毒的方法具有灵敏度高、特异性好、检测耗时短等优点,可以作为一种CGSRV的早期、快速、特异的检测方法,适合CGSRV的临床诊断与流行病学调查。