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前言 羊水栓塞(AFE)是一种发病率低但又不可预料且死亡率极高的最严重的产科并发症，并能在极短时间内发展为多器官功能障碍综合征(MODS)。由于AFE发病急促、病程进展迅速、死亡率极高，给疾病的发病机理研究、预防、诊断和治疗带来困难。髓过氧化物酶(MPO)存在于中性粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中，PMN激活时部分MPO可以释放。可作为中性粒细胞的标志物，敏感地反映出组织中性粒细胞浸润的程度。核因子-kB(NF-kB)是一种能与多种细胞因子基因启动子和增强子中的κB序列位点发生特异结合的核转录因子，具有广泛的生物学活性。受感染、创伤、氧化应激、内毒素(LPS)、细胞因子等多种刺激活化后发生核易位，在细胞核内能促进细胞因子、黏附分子、趋化因子等基因转录，可能与AFE所致多器官功能障碍综合征(MODS)的发生、发展有着密切的关系。地塞米松(Dex)具有抗炎、抗过敏作用，可以缓解炎症进程。本实验旨在通过妊娠晚期大鼠输入不同性质自体羊水，制造羊水入血模型，探讨核因子-kB(NF-kB)及髓过氧化物酶(MPO)在羊水入血造成肺损伤的机制及地塞米松的干预作用。 实验材料与方法 一、实验材料 1．选用雌性Wistar大鼠体重在320-380g(妊娠20日)70只，(购自中国医科大学第二临床学院实验动物中心)。精选满足实验要求者。随机分为对照组(生理盐水)、羊水组、治疗组A(羊水+Dex)、胎粪组、治疗组B(胎粪+Dex)。 2．实验试剂及设备： (1)试剂：兔抗鼠NF-kB p65抗体，MPO试剂盒。 (2)设备：血压监测仪(Siemens)，低温超速离心机(美国DU PONTSORVALL SUPER—T21型)，电泳仪(BIO-RAD POWERPAC 300)，电泳槽(DYY一111 28C型)，转印槽(DYY一111型)，匀浆仪(Heidolph)，数码图像分析系统。 二、实验方法: 1.制备实验用羊水及1%浓度胎粪液。 2.制作大鼠羊水人血模型。经颈动脉插管监测血压。由颈静脉注人不同性质羊水(0.25nl】/1009)。治疗组在注人羊水或胎粪液后给予地塞米松(0.lm岁1009)。60min后处死动物，取材。 3.提取肺组织核蛋白。 4.免疫蛋白印迹法(Westem一bfoo分析NF一KB两5蛋白表达:用数码图像分析系统进行扫描分析，结果用测得目标带的密度表示。 5.MPO测定:使用分光光度计(波长46Onm)测量305和905的吸光度(A)值。MPO活性(叮g湿组织)=△Ax(13.5)/组织湿重。△A是460nm条件下305到905吸收率的变化。系数13.5由经验确定。(1单位MPO活性是减少l阿01过氧化物/而n所需酶量)。 6.甩染色，光镜下观察肺组织病理改变。 7.免疫组化检测NF一kB P65蛋白表达:采用半定量计数方法对每个切片的10个视野在400倍率显微镜下计算P65阳性细胞百分数。 8.统计学分析:精选动物在实验中全部存活，满足本实验要求(实验前Bp>loo~Hg，总失血量<0.5血，输人液体量<3.0耐)。数据处理采用S只粥统计软件在微机上进行。所有检测结果用均数士标准差(又土s)表示，采用方差分析及t检验。检验水准取。二0 .05，当p<0.05时有显著性差异。实验结果 1.病理学检查:实验组肺组织不同程度水肿，血管丰富，局部可见少量出血，血管及支气管周围可见大量炎性细胞浸润，包括白细胞(主要为中性粒细胞)、巨噬细胞及少量淋巴细胞。对照组未见明显病理改变。 2.肺组织NF一kB活性及MPO含量:对照组仅含有极少量NF一kB及MPO;各实验组肺组织NF一kB结合活性及MPO含量较对照组升高，有显著差异(p<0.01);经Dex治疗后，NF一kB结合活性及MPO含量明显降低，与干预前相比具有显著性差异(p<0.05)，如表1所示。 3.免疫组化结果:对照组阳性细胞极少;羊水组、胎粪组肺组织内存在大量阳性细胞，差异显著(p<0.01);治疗组阳性细胞均少于治疗前，有明显差异(p<0.05)。讨论 髓过氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)存在于中性粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中，PMN激活时部分MPO可以释放，因此MPo可作为中性粒细胞的标志物，敏感地反映出组织中性粒细胞浸润的程度。本研究中除对照组外，其余各实验组病理切片中，肺组织不同程度水肿，血管丰富，肺实质局部可见少量出血，血管及支气管周围可见大量炎性细胞、巨噬细胞及少量淋巴细胞浸润，并伴MPO含量升高，且以胎粪组升高明显。这些结果提示，炎性反应参与了羊水人血造成的肺损伤，推测混浊羊水栓子对循环中的中性粒细胞有化学趋向的作用，进而肺中性粒细胞衍生的氧化剂及蛋白酶引起肺微血管损伤。肺泡巨噬细胞释放的炎性激肤亦可能引发肺毛细血管渗漏，造成肺损伤。 NF一kB是一种转录调节因子，由巧0和P65组成的异二聚体复合物，几乎存在于所有细胞中，在重症疾病的免疫调节方面有特殊的作用，尤其在调节SIRS和MODS等疾病的细胞转录因子、粘附分子等方面起到核心作用。本实验中中性粒细胞浸润并脱颗粒释放MPO，产生大量氧自由基;自由基刺激细胞促使NF一kB进人细胞核与TNF一。等细胞因子基因启动子kB序列结合，上调细胞因子基因转录与蛋白合成、分泌。而细胞因子与NF一kB以及细胞因子之间?