Fn14在上皮性卵巢癌转移中作用的研究

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目的:比较人上皮性卵巢癌细胞株HO8910和其配对高转移细胞株HO8910-PM中Fn14的表达情况及探讨Fn14在上皮性卵巢癌转移中的作用及其分子机制。  方法:⑴Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力;⑵Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14的表达情况;⑶免疫荧光法检测定HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14蛋白荧光的强弱;⑷构建Fn14表达质粒,通过lipofectamin2000法转染至HO8910-PM细胞并检测转染效率;⑸Tranwell法检测HO8910-PM细胞转染Fn14表达质粒后迁移能力和侵袭能力的变化;⑹CCK-8法检测HO8910-PM细胞转染Fn14表达质粒后增殖能力的变化;⑺Western Blot检测HO8910-PM细胞转染Fn14表达质粒后E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的变化;⑻构建稳定表达Fn14的HO8910-PM细胞株;⑼Slug表达质粒转染HO8910-PM-Fn14细胞株,并检测转染效率;⑽Tranwell法检测HO8910-PM-Fn14细胞转染Slug表达质粒后迁移能力和侵袭能力的变化;⑾Western Blot检测HO8910-PM-Fn14细胞株转染Slug表达质粒后细胞内E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的变化。  结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭的细胞数均多于HO8910细胞(P<0.05);HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P<0.05);HO8910细胞中的绿色荧光强度明显高于HO8910-PM细胞(P<0.05);转染Fn14-GFP表达质粒后,HO8910-PM细胞表达绿色荧光(GFP)以及的Fn14的表达水平明显升高;Fn14表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显降低;转染Fn14表达质粒不影响HO8910-PM细胞的增殖;转染Fn14表达质粒后,E-cadherin表达水平上调、N-cadherin表达水平下调、Vimentin表达水平下调,同时肿瘤微环境中的MMP2、MMP9水平下降;HO8910-PM-Fn14细胞表达的绿色荧光(GFP)以及Fn14的表达水平明显升高,稳定表达Fn14的HO8910-PM细胞株构建成功;HO8910-PM-Fn14细胞中Slug的表达水平下调;转染Slug表达质粒后,HO8910-PM-Fn14细胞表达红色荧光以及Slug的表达水平明显升高;Slug表达质粒转染HO8910-PM-Fn14细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显升高;转染Slug表达质粒后,HO8910-PM-Fn14细胞中E-cadherin表达水平下调、N-cadherin表达水平上调、vimentin表达水平上调,同时肿瘤微环境中的MMP2、MMP9水平升高。  结论:Fn14通过Slug逆转上皮性卵巢癌细胞EMT抑制了上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移。
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