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目的研究核糖核酸酶抑制因子（RI）蛋白与血管生成素（ANG）及其突变体蛋白的相互作用。探讨两者相互作用介导和调节膀胱癌细胞T24细胞生长的影响及其分子机制。方法1.首先以pCMV-3×flag-ANG为模板，PCR法扩增获得ANG的突变体pCMV-3×flag-ANGH37A。以pcDNA3.1-RI为模板，PCR法扩增RI编码区序列，将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中，构建原核表达质粒pGEX-4T-RI。再分别以pCMV-3×flag-ANG、pCMV-3×flag-ANGH37A和pcDNA3.1-RI为模板，PCR法扩增其编码区序列，构建真核表达质粒pEYFP-ANG、pEYFP-ANGH37A和pECFP-RI。2.在T24和HEK293细胞内进行RI与ANG及其突变体的免疫共沉淀实验与荧光共振能量转移实验。研究RI与ANG及其突变体在细胞内的相互作用。在细胞外应用GST pull-down方法研究RI与ANG及其突变体在体外的相互作用。在T24细胞和293细胞内进行RI与ANG及其突变体的免疫荧光共定位实验。此外，荧光共振能量转移（FRET）观察和结果也显示RI与ANG在细胞内的相互作用。3.将pCMV-3×flag-ANG及pCMV-3×flag-ANGH37A转染T24细胞和293细胞，检测RI与ANG相互作用对T24细胞的影响及介导PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的影响。4.构建裸鼠移植瘤模型，检测ANG蛋白及其突变体对于移植瘤生长，肿瘤新生血管以及自发转移等的影响。结果1.重组真核表达质粒pCMV-3×flag-ANGH37A、pEYFP-ANG、pEYFP-ANGH37A和pECFP-RI构建正确。重组原核表达质粒pGEX-4T-RI构建正确。2.实验结果显示在细胞内和细胞外，RI与ANG及其突变体均存在相互作用。3.通过pCMV-3×flag-ANG及pCMV-3×flag-ANGH37A转染T24细胞后，PI3K/AKT/mTOR通路的一些关键靶蛋白均呈现显著的升高，表明ANG可以通过此通路促进T24细胞的生长。4.移植瘤动物模型的实验结果表明，ANG蛋白及其突变体的过表达对于膀胱癌肿瘤的生长具有促进作用，并且其肿瘤组织中新生血管相比正常的肿瘤细胞组显著增加。结论综合以上研究成果，我们得出了以下的一些结论：内源性及外源性的核糖核酸酶抑制因子（RI）蛋白与血管生成素（ANG）及其突变体蛋白均存在相互作用。并且在此基础上，RI与ANG蛋白的相互作用，介导和调节膀胱癌细胞T24的PI3K/AKT/mTOR信号通路，进一步的影响了膀胱癌的生长及肿瘤新生血管的生成。