【摘 要】
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目的:明确SPARC和SPARCL-1在谷氨酸（Glu）诱导的海马神经元损伤中的表达水平;阐明SPARC和SPARCL-1通过调控自噬对Glu诱导海马神经元损伤的作用机制。方法:（1）构建海马神经元Glu损伤模型,通过Western bolt和免疫荧光检测SPARC、SPARCL-1和自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、beclin1、p62、p-mTOR/mTOR及p-AKT/AKT）的表达水平。
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目的:明确SPARC和SPARCL-1在谷氨酸（Glu）诱导的海马神经元损伤中的表达水平;阐明SPARC和SPARCL-1通过调控自噬对Glu诱导海马神经元损伤的作用机制。方法:（1）构建海马神经元Glu损伤模型,通过Western bolt和免疫荧光检测SPARC、SPARCL-1和自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、beclin1、p62、p-mTOR/mTOR及p-AKT/AKT）的表达水平。（2）分别构建SPARC或SPARCL-1敲低和过表达的海马神经元模型,检测自噬相关蛋白的表达,以及Glu处理后细胞活力及自噬相关蛋白的表达情况。（3）使用雷帕霉素处理SPARC或SPARCL-1敲低的海马神经元,构建SPARC或SPARCL-1和AKT同时敲低的细胞模型,检测自噬相关蛋白的表达情况。结果:（1）海马神经元Glu损伤模型与正常细胞相比,SPARC和SPARCL-1的表达增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin1增加,p62、p-mTOR及p-AKT降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）SPARC或SPARCL-1敲低的海马神经元与正常细胞相比,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin1增加,P62、p-mTOR及p-AKT降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。SPARC或SPARCL-1敲低的海马神经元Glu损伤模型与未敲低的Glu损伤模型相比,细胞活力显著升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;（3）SPARC或SPARCL-1过表达的海马神经元与正常细胞相比,细胞活力降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin1增加,p62、p-mTOR及p-AKT降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）SPARC或SPARCL-1敲低的海马神经元使用雷帕霉素处理后,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加,p-mTOR及p-AKT降低,与未使用雷帕霉素处理相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。SPARC或SPARCL-1和AKT同时敲低后,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加,p-mTOR及p-AKT降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）SPARC和SPARCL-1在Glu诱导的海马神经元损伤中表达增加。（2）SPARC和SPARCL-1通过AKT-mTOR通路调控自噬影响Glu诱导的海马神经元损伤。
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