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前期研究中,我们在高等真菌地花菌子实体提取物中得到新型抗肿瘤活性小分子探针grifolin。Grifolin为一种法尼基酚类化合物,具广谱抗肿瘤活性,可诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡发生。本课题以grifolin为研究对象,探究其对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响,及其发挥生物学功能的信号转导分子机制。首先,我们采用高转移肿瘤细胞系,通过体外细胞与动物实验确定grifolin对肿瘤转移生物学效应的影响。通过MTS实验,划痕实验与伪足实验证实grifolin可抑制肿瘤细胞增殖、迁移运动,粘附实验、Matrigel Transwell实验证明grifolin可抑制肿瘤细胞粘附与侵袭转移。可视化动物模型与组织细胞水平观察确定grifolin可抑制肿瘤细胞在裸鼠体内的转移。在明确grifolin可抑制肿瘤细胞迁移运动侵袭转移能力之后,我们探究其可能的作用机制。前期研究中利用信号转导筛选平台与分子对接、亲和层析及荧光淬灭实验证实grifolin可靶向MAPK信号转导通路,与ERK1/2激酶蛋白结合并抑制其活性。转录因子Elk-1是ERK1/2激酶入核后的直接底物,我们通过蛋白免疫印记实验证实grifolin下调Elk-1磷酸化水平,而Elk-1可与Fra-1基因启动子区血清响应元件SRE结合,染色质免疫共沉淀与定量PCR、免疫印记实验证实grifolin通过抑制ERK1/2激酶活性影响Elk-1与Fra-1启动子区的结合,下调Fra-1表达。基质金属蛋白酶MMPs与粘附分子CD44都与肿瘤的浸润转移密切相关,且MMPs与CD44启动子区均包含AP-1转录因子结合位点,Fra-1是AP-1家族的主要成员。我们通过定量RCR、Westernblot与免疫组化实验证实grifolin可显著降低MMP-2与CD44的mRNA与蛋白表达水平。综上,通过本课题的研究证实grifolin可抑制肿瘤侵袭转移,并揭示其发挥抗转移效应的分子机制为靶向ERK1/2-Elk-1-Fra-1信号通路,为grifolin作为抗肿瘤活性小分子化合物提供了新的实验依据。