论文部分内容阅读
节球藻毒素-R(NOD-R)是由丝状浮游蓝藻节球藻(Nodularia spumigena)产生的一种蓝藻肝毒素。研究表明,NOD-R不仅具有强烈的促癌作用,而且还是一种致癌剂。NOD-R的水溶性强、热稳定性好,而且耐受pH变化,因此,现有的自来水处理工艺,如沉淀、过滤和活性炭吸附等都无法将其完全去除。吸入NOD-R污染的水和误食NOD-R污染的水产品是导致中毒的主要途径。NOD-R是通过抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1(PP1)和2A(PP2A)的活性来发挥毒性作用的,其中毒症状主要表现为腹泻、乏力、厌食等,甚至死亡。目前,常用的NOD-R的检测方法主要有三种,即生物分析法、物理化学分析法和免疫化学法。但是,这些检测方法都存在一定的局限性,例如特异性差、成本高、耗时长等,亟需发展一种可以克服传统方法缺点的新型检测方法。适配体是一种新型分子识别元件,被誉为“化学抗体”。研究者们通过将其与生物传感器相结合,开发出了新的检测方法,并被广泛应用于毒品检测、食品安全和分析诊断等领域。本课题组通过磁珠筛选法(MB-SELEX)获得了NOD-R的最佳适配体N13,该适配体能够以很高的亲和力(K_D=138 nM)和NOD-R特异性结合。根据在线工具the mfold web server对适配体N13二级结构的预测结果,本课题组对适配体N13进行了截短优化,并获得了其核心区域N13-T-O2。优化后,适配体N13-T-O2与NOD-R之间的亲和力有所提高(K_D=29.6 nM)。生物膜干涉(BLI)技术是一种无需标记的技术,可以提供实时、高通量的生物分子相互作用信息。因此,借助BLI技术平台,本课题组以适配体N13-T-O2为识别分子,成功构建了一种灵敏度高、特异性强的NOD-R适配体传感器。该适配体传感器能够在15 min内完成NOD-R的检测,其线性检测范围为40-200 nM,检测限为167 pM,而且不和NOD-R类似物MC-LR以及其他类型的毒素,如GTX、STX、BTX和PTX等发生交叉反应。另外,该适配体传感器具有很好的稳定性和重复性(CV=8.23%)。为了评估该适配体传感器在实际样品检测中的应用潜能,本课题组还将该其应用于自来水中NOD-R的检测,结果表明该适配体传感器具有较高的回收率(91.92~102.16%)和较低的CV值(1.31~3.73%)。综上所述,本课题组获得了高亲和力、强特异性的NOD-R适配体N13-T-O2,并且,基于该适配体,构建了BLI适配体生物传感器,具有特异性强、灵敏度高、以及稳定性好等优点。因此,我们相信,这种新型BLI适配体传感器检测法有望成为NOD-R准确和快速检测方法的雏形,并为传统NOD-R检测方法的更新提供基础。