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miRNAs是一类长度为20～24nt的非编码内源性负调控因子,能够在转录水平以及转录后水平调控基因的表达。它通过与靶基因的完全或者部分互补配对来识别并指导靶基因的切割或者抑制靶基因的翻译,从而调节生物体的生长发育等各项生命活动。然而我们对miRNAs在甘蓝花粉发育过程中的表达特性知之甚少。本试验用RT-PCR(reverse transcription PCR)和q PCR(quantitative real-time PCR)法鉴定并比较了5个已知miRNAs(bol-miR157a、bol-miR171a、bol-miR172、bol-miR398a-3p、bol-miR824)和3个新miRNAs(bol-miR0023、bol-miR0101、bol-miR0142)在细胞质雄性不育系(CMS)甘蓝“Bo01-12A”和保持系甘蓝“Bo01-12B”的5个花粉发育时期的表达模式,并用ps RNATarget(http://plantgrn.noble.org/ps RNATarget/)在线软件对这8个miRNAs的靶基因进行预测。本试验主要结果如下:(1)以不同发育时期花蕾的总RNA为模版,利用茎环RT-PCR对8个miRNAs进行定性检测,均得到了一条大小约80 bp的扩增片段。说明这些miRNAs在甘蓝花蕾的5个发育时期均有表达并且试验中设计的茎环引物能够将目的miRNAs从花蕾总RNA中钓取出来。(2)采用q PCR方法对8个miRNAs进行表达水平检测,结果表明,8个miRNAs在甘蓝花蕾的5个发育时期均有表达且表达量差异较为明显,并且在保持系“Bo01-12B”的单核小孢子期表达量最高而在细胞质雄性不育系“Bo01-12A”的双核花粉期表达量最高。(3)利用ps RNATarget软件对8个miRNAs进行靶基因预测,共预测到92个靶基因。结果显示甘蓝花粉发育相关miRNAs的靶基因主要编码与应激反应相关的蛋白质、调节基因表达的转录因子以及与信号转导有关的酶等,而它们都参与植物花粉的发育。