番荔枝多糖ASPA80及ASPA80-1对小鼠巨噬细胞和树突状细胞免疫功能的影响及作用机制初步研究

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目的:本论文旨在探究番荔枝多糖ASPA80及ASPA80-1对小鼠RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞免疫功能的影响及作用机制。方法:1.倒置显微镜观察ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞形态的影响。2.通过MTT法考察ASPA80及ASPA80-1对树突状细胞增殖的影响。3.通过流式细胞术检测ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞表面CD11c、CD86和MHC II表达的影响。4.通过流式细胞术检测ASPA80及ASPA80-1对树突状细胞表面CD86和MHCII表达的影响。5.通过吞噬实验考察ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的影响。6.通过流式细胞术检测ASPA80及ASPA80-1对树突状细胞吞噬功能的影响。7.通过Griess法检测ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞分泌NO的影响。8.利用Western blotting法检测ASPA80及ASPA80-1对树突状细胞表面TLR2和TLR4蛋白表达的影响。9.利用Western blotting法检测ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞MAPKs信号通路相关蛋白表达的影响。10.利用Western blotting法检测ASPA80及ASPA80-1对RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果:1.ASPA80及ASPA80-1可改变RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞的形态,使其伪足变长、增多。2.ASPA80及ASPA80-1在31.25-500μg/mL浓度范围内对树突状细胞无细胞毒性。3.ASPA80及ASPA80-1可上调RAW264.7巨噬细胞表面CD11c、CD86和MHCII的表达。4.ASPA80及ASPA80-1可上调树突状细胞表面CD86和MHC II的表达。5.ASPA80及ASPA80-1可增强RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能;降低树突状细胞的吞噬功能。6.ASPA80及ASPA80-1可促进RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞分泌NO。7.ASPA80及ASPA80-1可上调RAW264.7巨噬细胞p-ERK、p-JNK、p-P38及p-NF-κB蛋白的表达,促进NF-κB的入核。8.ASPA80及ASPA80-1可上调树突状细胞TLR2、p-JNK、p-P38及p-NF-κB蛋白的表达,促进NF-κB的入核,但是对TLR4及p-ERK蛋白的表达没有明显的影响。结论:ASPA80及ASPA80-1可增强RAW264.7巨噬细胞和树突状细胞的免疫调节功能。ASPA80及ASPA80-1活化RAW264.7巨噬细胞可能与MAPKs及NF-κB信号通路相关蛋白的活化有关。ASPA80及ASPA80-1促进树突状细胞的成熟,可能与增强TLR2表达,激活MAPKs和NF-κB信号通路有关。
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