研究目的:非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是在不过量摄入酒精情况下,患者肝脏具有脂肪聚集的一种病症,截至目前,全世界患有非酒精性脂肪肝的人数占总体人口25%以上,如果不采取有效措施,NAFLD将迅速演化为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）,对人类生命健康造成巨大威胁。根据“多次打击学说”,NAFLD的发生发展过程机理复杂,并且有多种因素共同影响。这也是NAFLD治疗的困难所在。NAFLD/NASH患病率日益剧增使得患者所需的医疗资源越来越多,并且没有有效治疗NAFLD/NASH的药物研发成功,这也促使研究人员积极探索治疗NAFLD/NASH的可用药靶点,预计到2025年,这个药物市场每年的价值将达到200亿至350亿美元。RGS5所属的RGS超家族中R4/B亚家族是最小的RGS蛋白,RGS5在G蛋白和非GPCR依赖途径中介导多种细胞信号通路。研究发现RGS5对天然免疫有重要的调节作用,而天然免疫在疾病的发生发展过程中又有重要作用,大量证据表明RGS5会对以炎症发生为主的疾病发生有重要影响。但目前RGS5的研究大多聚集在心脏和血管重构,动脉粥样硬化等方面,而对NASH的作用报道很少。因此本课题的目的是探寻RGS5在NASH的发生发展中作用,并解释RGS5是如何在这个过程中发挥作用。研究内容:本研究首先通过wetern blot实验检测高脂高胆固醇饮食（High-fat and high-cholesterol diet,HFHC）或正常饮食（non-specific control,NC）喂养16周后的小鼠肝脏组织中RGS5的蛋白表达水平。为了进一步探讨RGS5在肝脏中的作用,我们构建了RGS5过表达和敲低细胞系,并通过肝细胞油红O染色实验和RT-PCR检测炎症和脂代谢相关指标等实验评估了RGS5对肝脏脂质积累的影响。然后通过构建Rgs5-CKO小鼠,以此研究RGS5对高脂高胆固醇（HFHC）诱导的NASH模型小鼠肝损伤的影响。我们首先检测肝体重比例的变化和血清ALT、AST、ALP等指标表达水平的变化。并用HE和油红O染色检测肝脏的病变程度;然后通过Cd11b,Ly6G染色检测肝脏的炎症细胞侵润情况;并利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测与脂质合成分解和炎症以及炎症因子等相关基因的表达。接下来通过SPR和α-SMA染色检测RGS5对肝脏纤维化的影响,并通过RT-PCR检测纤维化相关指标。在得到肯定结果后,我们又通过Western Blot检测RGS5对信号通路的影响。实验结果:结果表明RGS5在HFHC诱导的小鼠NASH模型中的蛋白表达水平明显下调。此外,体外功能缺失实验结果显示,RGS5敲低能明显促进脂质堆积和炎症因子表达。在动物模型中,RGS5敲除小鼠(Rgs5^-/-)加重HFHC诱导的肝脏病变,具体表现为明显增加胰岛素耐量和糖耐量;肝脏中形成大量脂质异位堆积,并且能显著影响脂质代谢等相关基因的表达;同时加剧肝脏炎性细胞浸润和纤维化程度,大幅度增加炎症、纤维化相关指标基因表达水平。在HFHC诱导的模型和PA诱导的细胞模型中,RGS5与MAPK-JNK1/2和MAPK-p38活化呈明显负相关;并且RGS5能影响TAK1磷酸化水平。实验结论:通过体外、体内实验,一致得出RGS5对NASH的疾病进展都有明显的抑制作用;并且初步探讨了RGS5通过介导MAPK信号调控NASH的分子机制。虽然RGS5影响其他疾病的发生也有报道,但我们首次证实了RGS5对NASH的发生有重要作用,并且确定了其中的关键分子机制。这不仅加强了我们对NASH发生机制的了解,也是对天然免疫在NASH发生发展的作用的进一步完善。为NASH的治疗提供了新的分子靶标和药物设计新的思路。