三氧化二砷对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞Ras-p38MAPK通路的调控研究

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目的:1.观察TNF-α对RAFLS的Ras-p38MAPK信号通路活化水平的影响。2.观察不同浓度的ATO对TNF-α诱导的Ras-p38MAPK信号通路活化水平的影响。方法:1.从RA患者的膝关节腔积液中获取标本进行原代培养RA FLS细胞。培养至第3代即获得纯化的RA FLS细胞。2.使用10μg/L的TNF-α与第3代RA FLS共孵育30min,运用Western-blot检测其与空白对照组的Ras、p-p38的表达水平。3.将三种不同浓度的ATO(0.5μmol/L、5μmol/L、25μmol/L)与RAFLS细胞共孵育24h,然后终止反应,将10μg/L TNF-α与之共孵育30min,终止反应进行Western blot检测每个组的Ras、p-p38的表达水平。结果:1.原代培养有较多的巨噬细胞,随着传代的进行,其逐渐被去除。到第三代培养的细胞基本上都是RA FLS细胞。2.TNF-α刺激后的RAFLS,通过Western blot检测表明Ras, p-p38表达水平明显升高。(p<0.05)3.相对于TNF-α诱导组,ATO组能够降低TNF-α诱导RA FLS的Ras-p38MAPK通路活化时Ras、p-p38的表达水平,这种抑制作用呈剂量依耐性。(p<0.05)结论:1.以关节腔积液来源的原代培养经过传代后,到第3代时基本上为纯化的RA FLS。2.TNF-α能明显提高RAFLS的Ras-p38MAPK信号通路活化水平。3.ATO能够呈剂量依赖性的抑制RAFLS的Ras-p38MAPK信号通路的活化水平。
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