辅酶Q10对口腔溃疡影响的动物实验研究

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目的:通过建立大鼠的口腔溃疡动物模型,观察辅酶Q10对大鼠口腔溃疡的影响,验证其对口腔溃疡的防治作用,并对辅酶Q10的作用机制进行初步探讨,为临床口服药物防治口腔溃疡提供理论基础。方法:运用崔相一[1]、彭玉梅[2]等人的模型制备方法选取6周龄200g左右SD大鼠23只,利用spss软件随机分为3组:正常对照组(normal control group,NCG)5只;辅酶Q10应用组(coenzyme Q10group,CoQ10G)8只;口腔溃疡对照组(oral ulcer model group,OUMG)8只,另有2只用于口腔溃疡模型鉴定(提供正常组织和溃疡组织标本)。动物分笼饲养,自由摄食摄水。适应性喂养一周后,正常对照组不作处理,其它两组抓取固定后,用蘸有体积分数为40%冰醋酸的直径3mm滤纸贴付于大鼠右侧口角偏下唇处,作用60s,生理盐水冲洗1min。24小时后观察大鼠右侧口角黏膜约3mm直径溃疡形成,表面黄白色假膜覆盖,边缘充血水肿。辅酶Q10应用组每日给药288mg/kg,正常对照组及口腔溃疡对照组每日给等容量双蒸水,给药方式皆为灌胃。各实验组(CoQ10G、OUMG)分别于给药的第3天,第5天,第8天随机抽取一只大鼠观察溃疡愈合情况并处死迅速切取溃疡的口腔黏膜组织置于4%多聚甲醛溶液中,行HE染色组织病理学检查和免疫组化分析,其它大鼠记录愈合日期,溃疡刚好全部愈合后,颈椎脱臼法处死三组大鼠并迅速剪取口腔黏膜溃疡组织及正常对照组相应部位组织,-80℃保存,分光光度法测超氧化物歧化酶SOD(superoxidedismutase, SOD)的活性、硫代巴比妥酸(thibabituric acid,TBA)法测丙二醛MDA(Malondialdehyde)的含量。结果:1创伤性口腔溃疡动物模型的建立冰醋酸处理大鼠24h后大鼠相应黏膜处形成3mm直径的圆形缺损,略为凹陷,边缘整齐,周边红肿充血,表面黄白色假膜覆盖。2组织形态学观察(模型鉴定)正常大鼠口腔黏膜组织:大鼠口腔黏膜上皮完整连续,基底层、棘层、颗粒层、角化层细胞排列有序,胞核胞浆清晰无异型性表现、无空泡性变,上皮下固有层炎性细胞少,上皮钉突较短且整齐(Fig.1)。大鼠口腔溃疡黏膜组织:口腔黏膜上皮层连续性中断,溃疡达棘层,可见棘层以上细胞不规则,边缘不清晰,胞核固缩,胞浆空泡性变,大量细胞崩解,细胞间散在淋巴细胞、中性粒细胞浸润,基底层细胞可见核浓染,核浆比增大,上皮钉突延长,溃疡表面有红染的坏死组织覆盖(Fig.2)。3一般状况实验组(CoQ10组、OUM组)与正常对照组相比较,一般状况无明显改变。4肉眼观察给药第3日,辅酶Q10应用组充血水肿稍有减轻,其它组未见改变;给药第5日,辅酶Q10应用组溃疡面积减小,充血水肿减轻,口腔溃疡对照组个别大鼠水肿减轻;给药第8日,辅酶Q10应用组溃疡面积缩小,假膜脱落,充血不明显,口腔溃疡对照组,水肿减轻,个别大鼠假膜脱落。给药第13日,辅酶Q10应用组溃疡全部愈合,上皮细胞完全覆盖溃疡面,周围颜色和质地均与正常黏膜无差异,口腔溃疡对照组大部分已恢复正常色泽和质地,仅个别大鼠原溃疡处点状充血。5镜下观察给药第3日,辅酶Q10应用组和口腔溃疡对照组上皮均不完整,棘层以上细胞边缘不清晰,大量细胞空泡性变,细胞间淋巴细胞浸润(Fig.3、Fig.6);给药第5日,辅酶Q10应用组空泡性变的细胞减少,细胞间炎性细胞减少,基底细胞规整,口腔溃疡对照组异常细胞有所减少(Fig.4、Fig.7);给药第8日,辅酶Q10应用组上皮层趋于正常,表层变性坏死的细胞减少,细胞排列趋于规整,上皮下层成纤维细胞排列紧密,口腔溃疡对照组仍可见不规整细胞和较多的炎性细胞(Fig.5、Fig.8)。6免疫组织化学观察正常对照组及溃疡当日对大鼠口腔黏膜上皮CK19的表达较少,仅在上皮基底层散在表达。(Fig.9、Fig.10)给药第3日,口腔溃疡对照组和辅酶Q10应用组CK19的表达率均较少,直到给药第5日,两者上皮颗粒层大量表达CK19;给药第8日,CK19表达率进一步提高,可见辅酶Q10应用组比口腔溃疡对照组CK19表达率更高(Fig.11-Fig.16)。7口腔黏膜组织匀浆SOD活性程度及MDA含量检测正常对照组中SOD含量(131.01±16.09)U/mg均高于辅酶Q10应用组及口腔溃疡对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MDA含量(1.31±0.15)nmol/mg均低于辅酶Q10应用组及口腔溃疡对照组,差异有显著性(P<0.05);并且,辅酶Q10应用组口腔黏膜组织中SOD水平(114.81±3.69)U/mg相比口腔溃疡对照组(89.65±12.50)U/mg高,MDA含量(1.83±0.13)nmol/mg相比口腔溃疡对照组(2.26±0.13)nmol/mg低,差异有统计学意义(P<0.05)(见Table2、Fig.Ⅰ、Fig.Ⅱ)。8口腔溃疡对照组和辅酶Q10应用组大鼠溃疡愈合时间比较口腔溃疡对照组大鼠溃疡愈合时间12±1.58d,辅酶Q10应用组大鼠溃疡愈合时间9.4±1.14d,P<0.05,差异有统计学意义,可以认为辅酶Q10应用组先于口腔溃疡对照组愈合。结论:1用体积分数40%的冰醋酸烧灼大鼠口腔黏膜的方法可以造成其损伤性浅层溃疡,愈合时间大约13天。2口腔溃疡有自愈倾向,从组织病理形态学和免疫组织化学方面均证实,以水溶性辅酶Q10灌胃的大鼠比口腔溃疡对照组大鼠愈合快且好。3用化学分析的方法测定大鼠口腔黏膜组织中SOD、MDA的含量,发现正常组织中有一定的抗氧化能力,并且辅酶Q10能够增强抗氧化系统功能同时抑制脂质过氧化作用,起到促进溃疡愈合的功效。4辅酶Q10可促进溃疡愈合,缩短溃疡愈合时间。5口服辅酶Q10对口腔溃疡具有预防和治疗作用。
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