前言缺血性脑血管病严重危害人类健康,致死率和致残率均较高。脑缺血治疗的关键是减轻脑缺血半暗带神经元凋亡。临床一直把寻找确实有效的脑保护剂药物作为科研工作的重点内容。ATP敏感性钾通道(K_ATP)开放剂是近年来一种新兴的脑保护剂。但其保护作用的具体机制仍不清楚。PI3K（phosphatidylinositol 3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶）/AKT（v-akt murine thymoma viral oncogene homolog）信号转导途径是细胞内重要的信号转导通路,在细胞的凋亡,存活,增殖等活动中具有重要的生物学功能。PI3K/AKT信号通路作为一种细胞存活信号通路,其神经保护作用已得到确认。PI3K/Akt信号通路能直接诱导抗凋亡蛋白Bcl-2上调。本研究通过PC12细胞培养方法,观察K_ATP通道开放剂对缺血缺氧诱导PC12细胞凋亡及p-Akt和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响,探讨K_ATP通道开放剂的脑保护作用机制,为K_ATP通道开放剂能尽早应用于临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。目的观察K_ATP通道开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡影响,并进一步探讨K_ATP通道开放剂对抗缺血缺氧后PC12细胞凋亡的信号转导机制,明确K_ATP通道开放剂是通过PI3K/Akt/Bcl-2信号转导通路来抑制凋亡,为K_ATP通道开放剂能尽早应用于临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。实验方法取传代后3d的PC12细胞,分为A组（正常对照组）、B组（缺血对照组）、C组（吡那地尔处理组）、D组（吡那地尔+格列吡嗪处理组）共4组。C组在PC12细胞缺血缺氧前20min加入浓度为100μmol.L^-1的吡那地尔;D组则加入浓度100μmol.L的吡那地尔^-1和浓度为500μmol.L^-1的K_ATP通道阻断剂格列吡嗪,采用Annexin-v FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用免疫荧光染色和Western-blotting检测p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平,应用RT-PCR检测Akt、Bcl-2mRNA表达水平,观察K_ATP开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡的保护作用。实验结果1.PC12细胞凋亡结果B,C,D组细胞凋亡率随时间点增加而增加,24小时达高峰。以后随时间延长,逐渐降低。各个时间点B,C,D组细胞凋亡率均高于A组（P＜0.01）,C组和B,D组比较,细胞凋亡率显著降低（P＜0.01）,B和D组比较无显著性差异（P＞0.05）。2.免疫荧光结果B,C,D组各时间点均见P-Akt,Bcl-2表达,均以胞浆表达为主,偶见胞核表达。K_ATP通道开放剂组表达最明显。比较PC12细胞各组荧光强度,B,C,D组均显著高于对照组（P＜0.01或P＜0.05）,但C组显著高于B和D组（P＜0.01）,B组和D组无差别（P＞0.05）。3.蛋白免疫印迹结果B,C,D组随时间延长p-Akt、Bcl-2蛋白表达增加,12小时达高峰。以后逐渐减少。B,C,D组均显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。C组表达显著高于B和D组（P＜0.01）。B和D组比较无差异（P＞0.05）。4.半定量RT-PCR结果B,C,D组随时间延长Akt、Bcl-2 mRNA表达增加,12小时达高峰。以后逐渐减少。B,C,D组均显著高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。C组表达显著高于B和D组（P＜0.01）。B和D组比较无差异（P＞0.05）。结论K_ATP通道开放剂吡那地尔能明显降低缺血缺氧后PC12细胞凋亡,增加P-akt,Bcl-2蛋白及mRNA表达,提示K_ATP通道开放剂可能通过激活PI3K/Akt/Bcl-2途径来减少缺血缺氧后PC12细胞凋亡。